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肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

[交流] pcr 不出目的条带 已有4人参与

半个月前设计的引物,用DNA跑出条带后,送去测序,与设计的相吻合。可是最近跑PCR,只有质粒出,DNA一个条带都不出,不知道什么原因,是需要改变体系么?怎么改体系呢?新手,谢谢啦!用过两个体系尝试,如下:
反应体系:20                 体系2:20
dNTP  0.5                     dNTP   0.4
Buffer  0.5                    Buffer  2
ddH2O  13.5                 ddH2O  10.4
上游引物  2                   上游引物:1.5
下游引物  2                   下游引物:1.5
DNA  1                          DNA   4

pcr 不出目的条带
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肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 没想好名字 at 2015-07-19 09:04:11
话说你的酶呢?dntp和buffer各2ul,引物1ul,模板你就要做个梯度试一下了

酶忘记写了。。。之前跑出来的模板不可以直接用么?
4楼2015-07-20 14:05:52
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great07225388

新虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-17 22:58:08
是以前跑pcr能出结果,现在跑,出不来了吗?如果是,模板可能降解了,建议下次把模板跑个胶看看有没有降解。或者什么东西加错了,或者上下游引物忘了加其中的一个,等等。先排除主观原因,再排除客观原因。祝实验顺利!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-07-17 17:09:53
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没想好名字

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
话说你的酶呢?dntp和buffer各2ul,引物1ul,模板你就要做个梯度试一下了
3楼2015-07-19 09:04:11
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肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by great07225388 at 2015-07-17 17:09:53
是以前跑pcr能出结果,现在跑,出不来了吗?如果是,模板可能降解了,建议下次把模板跑个胶看看有没有降解。或者什么东西加错了,或者上下游引物忘了加其中的一个,等等。先排除主观原因,再排除客观原因。祝实验顺 ...

是啊,之前有的。排除了东西忘加的问题,东西也都换过新的。模板是最近新提取的,应该没有降解啊。。。
5楼2015-07-20 14:08:59
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