应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr 不出目的条带
81/1返回列表
查看: 1026  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)

[交流] pcr 不出目的条带 已有4人参与

半个月前设计的引物，用DNA跑出条带后，送去测序，与设计的相吻合。可是最近跑PCR，只有质粒出，DNA一个条带都不出，不知道什么原因，是需要改变体系么？怎么改体系呢？新手，谢谢啦！用过两个体系尝试，如下：
反应体系：20                 体系2：20
dNTP  0.5                     dNTP   0.4
Buffer  0.5                    Buffer  2
ddH2O  13.5                 ddH2O  10.4
上游引物  2                   上游引物：1.5
下游引物  2                   下游引物：1.5
DNA  1                          DNA   4

pcr 不出目的条带
untitled.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-07-17 13:58:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

great07225388

新虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-07-17 22:58:08
是以前跑pcr能出结果，现在跑，出不来了吗？如果是，模板可能降解了，建议下次把模板跑个胶看看有没有降解。或者什么东西加错了，或者上下游引物忘了加其中的一个，等等。先排除主观原因，再排除客观原因。祝实验顺利！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-07-17 17:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没想好名字

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
话说你的酶呢？dntp和buffer各2ul，引物1ul，模板你就要做个梯度试一下了
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-19 09:04:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 没想好名字 at 2015-07-19 09:04:11
话说你的酶呢？dntp和buffer各2ul，引物1ul，模板你就要做个梯度试一下了

酶忘记写了。。。之前跑出来的模板不可以直接用么？
赞一下 回复此楼
4楼2015-07-20 14:05:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肉肉-rourou

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by great07225388 at 2015-07-17 17:09:53
是以前跑pcr能出结果，现在跑，出不来了吗？如果是，模板可能降解了，建议下次把模板跑个胶看看有没有降解。或者什么东西加错了，或者上下游引物忘了加其中的一个，等等。先排除主观原因，再排除客观原因。祝实验顺 ...

是啊，之前有的。排除了东西忘加的问题，东西也都换过新的。模板是最近新提取的，应该没有降解啊。。。
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-20 14:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

great07225388

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 肉肉-rourou at 2015-07-20 14:08:59
是啊，之前有的。排除了东西忘加的问题，东西也都换过新的。模板是最近新提取的，应该没有降解啊。。。...

这样啊，做个阳性对照试试。祝实验成功哦！

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
6楼2015-07-20 15:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

土豆没了

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最近在做PCR，也遇到过这种情况，但是后面不知道怎么滴它也能出来，换模版换程序换试剂都试过，个人感觉模版放-20是没问题的，没有那么容易降解，还有就是混匀问题，体系最好按照试剂说明书上面的
赞一下 回复此楼
生活因拼搏而精彩，生命因奋斗而高贵
7楼2015-07-27 16:35:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
排除了模板问题，引物也需要验证，此外注意优化体系，摸索退火温度吧，具体操作还是看自己，可以产生热启动PCR酶扩增，高保真taq聚合酶类的热启动形式也可以采用，扩增效果很好
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-07-27 17:07:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 肉肉-rourou 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +4 a089 2026-08-07 4/200 2026-08-08 12:15 by arzu_hma
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 10:39 by 3OOjAIS77qg2
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] fileCode有新解读？ +8 Tide man 2026-08-08 16/800 2026-08-08 09:59 by Tide man
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 08:59 by 6vVgjDL4CnGu
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:27 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 4/200 2026-08-08 08:21 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭