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rabbitzumi铜虫 (小有名气)
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[交流]
问一个关于荧光实时定量PCR的问题 已有2人参与
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最近在线设计了一对引物，合成回来做了个预实验，大鼠的TNFa, 反应体系如下： 2* UltraSYBR Mix : 12.5 uL Forward primer: 0.5 uL(Final concentration: 200 nM) Reverse primer: 0.5 uL(Final concentration: 200 nM) Template DNA: 1 uL RNase free water: 10.5 uL 总反应体系为 25 uL. 上下游引物的退火温度分别为：48.7 和46.6 度。 反应条件也基本按照试剂盒说明: 预变性 95度 10min 变性 95度 15 s 退火/延伸 48度 1 min 变性和退火/延伸 共计循环 40次 溶解曲线分析：参照仪器默认设定 下面是我的实验结果： 我的问题是：扩增曲线怎么会是负值？  realtime PCR.png |
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