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跑出来的PCR结果一直是这样的，不知各位大虾可否指点指点，多谢多谢 已有11人参与
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应该跑出目的条带的，可是一直是拖尾，从加样孔就开始拖。。。。 怎么办，是什么问题呢希望各位大哥大姐路过的看过的给指点指点哦  IMG_20150610_124807.jpg  IMG_20150616_120302.jpg  IMG_20150616_120356.jpg |
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aoaoshch
木虫 (小有名气)
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- 在线: 105小时
- 虫号: 800123
- 注册: 2009-06-28
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
9楼2015-06-17 10:47:06
2楼2015-06-16 20:19:10
3楼2015-06-16 20:33:08
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我做的是长距离PCR，要跑出的条带是12000和11000，就是应该是电泳图上最上边两条marker之间的条带。一直是拖尾。 三条引物是：（上游引物）P：5’一GCC CTG CCT GTC CAT TAC ACT GAT GAC ATT ATG CTG AC-3’ （下游引物）Q：5'-GGC CCT ACA ACC ATT CTG CCT TTC ACT TTC AGT GCA ATA-3’ （下游引物）B：5’-CCC CAA ACT ATA ACC AGC ACC TTG AAC TTC CCC TCT CATA-3’； 反应体系：引物P、Q、B(20 pmol／ul)分别2ul、1ul、1ul，模板基因组DNA 2ul(约100 ng)，TaKaRa LA Taq酶0．25ul(5 U／ul)，2×GC缓冲液I 12．5ul，dNTP 4ul，蒸馏水补足，总反应体积25ul。 反应条件：94℃预变性2 min，前10个循环98℃变性10 s，68℃退火／延伸10 min，后20个循环98℃变性10 s，68℃延伸10 min 20s，共进行30个循环。电泳：配制6g/L琼脂糖凝胶，PCR产物5ul与6×上样缓冲液1ul混匀上样，在恒压75 V电泳，成像 我就是想问问这样拖带可能跟什么关系最大  我做的时候就一直在变化引物浓度比例，和退火温度。用梯度PCR仪做过，退火温度从65、66、-69、70，也没什么明显的结果条带哦 |
4楼2015-06-16 21:55:43
