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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 做融合蛋白的表达，这样加linker可以吗？
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gstracy

新虫 (初入文坛)

[求助] 做融合蛋白的表达，这样加linker可以吗？已有4人参与

我最近在做A-GFP融合蛋白的表达，根据文献，要加一个（GGGGSGGGGS） linker，于是我在设计A基因的扩增引物时加上了这段linker，
也就是说下游引物是【酶切位点+linker+A基因部分序列】，这样设计下来，引物就有55bp，担心这种设计会降低引物特异性。
请问这样可行吗？
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1楼2015-06-07 19:30:56
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物特异性你加上之后分析一下5‘端没有错配就应该没问题，引物长了之后Tm值会上升，再扩增的时候要考虑一下两端的tm值
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2楼2015-06-09 09:00:17
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
没什么问题，我之前帮人设计的就是60多碱基的引物，也是酶切位点+linker+A基因部分序列扩增效果很好，只要看你前面的基因部分序列是不是唯一的结合
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3楼2015-06-09 13:27:59
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ssy2014

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没问题的，加linker的引物一般都比较长，我设计过七八十bp的，只要保证正确，配对的碱基数目够用，肯定没问题
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4楼2015-06-09 22:01:30
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protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你好，我也在做绿色荧光蛋白连接蛋白的实验，可以交流下吗？
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5楼2015-08-27 21:30:54
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gstracy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by protein780 at 2015-08-27 21:30:54
你好，我也在做绿色荧光蛋白连接蛋白的实验，可以交流下吗？

请问你还在做这个实验吗？
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6楼2016-06-26 19:44:25
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