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gstracy

新虫 (初入文坛)

[求助] 做融合蛋白的表达,这样加linker可以吗? 已有4人参与

我最近在做A-GFP融合蛋白的表达,根据文献,要加一个(GGGGSGGGGS) linker,于是我在设计A基因的扩增引物时加上了这段linker,
也就是说下游引物是【酶切位点+linker+A基因部分序列】,这样设计下来,引物就有55bp,担心这种设计会降低引物特异性。
请问这样可行吗?
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sh_9153

银虫 (小有名气)

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感谢参与,应助指数 +1
引物特异性你加上之后分析一下5‘端没有错配就应该没问题,引物长了之后Tm值会上升,再扩增的时候要考虑一下两端的tm值
2楼2015-06-09 09:00:17
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与,应助指数 +1
没什么问题,我之前帮人设计的就是60多碱基的引物,也是酶切位点+linker+A基因部分序列扩增效果很好,只要看你前面的基因部分序列是不是唯一的结合
3楼2015-06-09 13:27:59
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ssy2014

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没问题的,加linker的引物一般都比较长,我设计过七八十bp的,只要保证正确,配对的碱基数目够用,肯定没问题
4楼2015-06-09 22:01:30
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protein780

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你好,我也在做绿色荧光蛋白连接蛋白的实验,可以交流下吗?
5楼2015-08-27 21:30:54
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gstracy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by protein780 at 2015-08-27 21:30:54
你好,我也在做绿色荧光蛋白连接蛋白的实验,可以交流下吗?

请问你还在做这个实验吗?
6楼2016-06-26 19:44:25
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