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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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夏冰莲

新虫 (小有名气)

[求助] DNA提取 电泳显示有很多很小片段 已有5人参与

提取的真菌DNA ,电泳条带最前面很亮,怎么回事,影响PCR吗?

DNA提取   电泳显示有很多很小片段
20150516_看图王.jpg
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小蚂蚁虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
夏冰莲(晞朔代发): 金币+1 2015-05-17 13:30:46
可能是蛋白 不影响PCR 但是你下面怎么那么亮
2楼2015-05-16 18:49:37
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602059625

金虫 (知名作家)

[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
3楼2015-05-17 08:13:46
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议用酚多抽提一次
4楼2015-05-17 13:10:47
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我恨果冻

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

下面特别亮的光团吗?是不是没有进行RNA消化?建议加RNA酶消化一个小时。胶孔里的东西可能是一些杂质,大概抽提的时候不小心抽到蛋白了。
5楼2015-05-19 18:30:13
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崔兵杰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好,我想问一下你的电泳跑了多久?我也是提的真菌DNA,但是一直跑不出条带,前面很亮,进样孔感觉有条带,老师说建议跑一到两个小时才好,我又跑了个一个半小时,结果前面的跑没了,进样孔里的好像刚刚要出孔的样子,加的D2000,marker也跑没了。
6楼2015-05-23 07:33:49
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erland21411

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 崔兵杰 at 2015-05-23 07:33:49
你好,我想问一下你的电泳跑了多久?我也是提的真菌DNA,但是一直跑不出条带,前面很亮,进样孔感觉有条带,老师说建议跑一到两个小时才好,我又跑了个一个半小时,结果前面的跑没了,进样孔里的好像刚刚要出孔的 ...

你做的胶是百分之多少的啊?前面很亮一般就是RNA了,点样孔是真个都亮还是亮在电泳方向的一边啊?如果是后者那可能是DNA,而且你跑DNA的话可以考虑换一些大分力量的M。
7楼2015-05-23 22:36:40
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崔兵杰

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by erland21411 at 2015-05-23 22:36:40
你做的胶是百分之多少的啊?前面很亮一般就是RNA了,点样孔是真个都亮还是亮在电泳方向的一边啊?如果是后者那可能是DNA,而且你跑DNA的话可以考虑换一些大分力量的M。...

我用的1%的胶,跑四十分钟的话整个进样孔都是亮的,然后跑了个一个半小时的话进样孔的好像刚要出孔,后来换了marker,λDNA/hind III,结果跑了两个小时后好像还不如一个半小时的效果好,然后刚刚又跑了个100min的,还是进样孔亮,不过有一个样品走到胶的一半位置了,不过像是拖带的样子,很宽的那种条带,不是marker那种条带的样子,会不会我一直就没把DNA提出来?还是说,提出来后时间太久,降解了?我在-20℃保存的,不过经常拿出来用。再就是用EB染色的话,如果样品有蛋白质,蛋白质也会发亮么,我们老师说蛋白质不会被EB染色,但是我看这里好多人说进样孔亮是蛋白质发亮。
8楼2015-05-24 10:10:21
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夏冰莲

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 崔兵杰 at 2015-05-23 07:33:49
你好,我想问一下你的电泳跑了多久?我也是提的真菌DNA,但是一直跑不出条带,前面很亮,进样孔感觉有条带,老师说建议跑一到两个小时才好,我又跑了个一个半小时,结果前面的跑没了,进样孔里的好像刚刚要出孔的 ...

40分钟,电压100
9楼2015-05-24 10:22:53
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夏冰莲

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 602059625 at 2015-05-17 08:13:46
是rna

恩,用RNA酶消化一下好多了,但是DNA条带也变的不亮了,我的RNA酶配制后用沸水浴15分钟呢,在100ul中加了2ul的10mg/ml的rna酶
10楼2015-05-24 10:25:27
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