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夏冰莲

新虫 (小有名气)

[求助] DNA提取 电泳显示有很多很小片段 已有5人参与

提取的真菌DNA ,电泳条带最前面很亮，怎么回事，影响PCR吗？

DNA提取   电泳显示有很多很小片段
20150516_看图王.jpg
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1楼 2015-05-16 17:00:05
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小蚂蚁虫

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
夏冰莲(晞朔代发): 金币+1 2015-05-17 13:30:46
可能是蛋白 不影响PCR 但是你下面怎么那么亮
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2楼2015-05-16 18:49:37
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602059625

金虫 (知名作家)
是rna
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[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
3楼2015-05-17 08:13:46
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议用酚多抽提一次
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4楼2015-05-17 13:10:47
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我恨果冻

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

下面特别亮的光团吗？是不是没有进行RNA消化？建议加RNA酶消化一个小时。胶孔里的东西可能是一些杂质，大概抽提的时候不小心抽到蛋白了。
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5楼2015-05-19 18:30:13
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崔兵杰

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，我想问一下你的电泳跑了多久？我也是提的真菌ＤＮＡ，但是一直跑不出条带，前面很亮，进样孔感觉有条带，老师说建议跑一到两个小时才好，我又跑了个一个半小时，结果前面的跑没了，进样孔里的好像刚刚要出孔的样子，加的Ｄ２０００，ｍａｒｋｅｒ也跑没了。
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6楼2015-05-23 07:33:49
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erland21411

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 崔兵杰 at 2015-05-23 07:33:49
你好，我想问一下你的电泳跑了多久？我也是提的真菌ＤＮＡ，但是一直跑不出条带，前面很亮，进样孔感觉有条带，老师说建议跑一到两个小时才好，我又跑了个一个半小时，结果前面的跑没了，进样孔里的好像刚刚要出孔的 ...

你做的胶是百分之多少的啊？前面很亮一般就是RNA了，点样孔是真个都亮还是亮在电泳方向的一边啊？如果是后者那可能是DNA，而且你跑DNA的话可以考虑换一些大分力量的M。
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7楼2015-05-23 22:36:40
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崔兵杰

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by erland21411 at 2015-05-23 22:36:40
你做的胶是百分之多少的啊？前面很亮一般就是RNA了，点样孔是真个都亮还是亮在电泳方向的一边啊？如果是后者那可能是DNA，而且你跑DNA的话可以考虑换一些大分力量的M。...

我用的１％的胶，跑四十分钟的话整个进样孔都是亮的，然后跑了个一个半小时的话进样孔的好像刚要出孔，后来换了ｍａｒｋｅｒ，λＤＮＡ／ｈｉｎｄ　ＩＩＩ，结果跑了两个小时后好像还不如一个半小时的效果好，然后刚刚又跑了个１００ｍｉｎ的，还是进样孔亮，不过有一个样品走到胶的一半位置了，不过像是拖带的样子，很宽的那种条带，不是ｍａｒｋｅｒ那种条带的样子，会不会我一直就没把ＤＮＡ提出来？还是说，提出来后时间太久，降解了？我在－２０℃保存的，不过经常拿出来用。再就是用ＥＢ染色的话，如果样品有蛋白质，蛋白质也会发亮么，我们老师说蛋白质不会被ＥＢ染色，但是我看这里好多人说进样孔亮是蛋白质发亮。
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8楼2015-05-24 10:10:21
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夏冰莲

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 崔兵杰 at 2015-05-23 07:33:49
你好，我想问一下你的电泳跑了多久？我也是提的真菌ＤＮＡ，但是一直跑不出条带，前面很亮，进样孔感觉有条带，老师说建议跑一到两个小时才好，我又跑了个一个半小时，结果前面的跑没了，进样孔里的好像刚刚要出孔的 ...

40分钟，电压100
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9楼2015-05-24 10:22:53
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夏冰莲

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 602059625 at 2015-05-17 08:13:46
是rna

恩，用RNA酶消化一下好多了，但是DNA条带也变的不亮了，我的RNA酶配制后用沸水浴15分钟呢，在100ul中加了2ul的10mg/ml的rna酶
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10楼2015-05-24 10:25:27
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