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panl234

银虫 (正式写手)

[求助] 基因组DNA电泳图,求高手讲解!!! 已有1人参与

这是我从293细胞中提取的基因组DNA电泳图(见附件),marker是DL2000。我看了别人的电泳结果,都是很高的位置,从上向下弥散,为什么我的结果正好相反,片段总是很小,从下向上弥散?而且在每个泳道的两个边缘有弥散的细纹?基因组DNA应该是很大的片段啊!求高手指导~~~
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-29 08:36:23
样品是否消化了RNA,感觉下面的小带是未降解掉的RNA。上面也有点东西,应该是基因组DNA了,你试试消化了RNA后再电泳看一下。
2楼2013-05-29 07:24:17
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
panl234(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-29 18:50:23
很明显 DNA降解严重 最下面的可能是小RNA  考虑提DNA步骤没注意好 把你的步骤发过来
3楼2013-05-29 09:20:46
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panl234

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-05-29 09:20:46
很明显 DNA降解严重 最下面的可能是小RNA  考虑提DNA步骤没注意好 把你的步骤发过来

1、10 cm-plate细胞,200 ul SDS裂解buffer冰上裂解10min。
2、8 ul 5M NaCl 及10 ul 蛋白酶K,65 ℃消化过夜。
3、200 ul TE稀释SDS,加500 ul 酚:氯仿:异戊醇混合物,剧烈混匀,RT,5 min,12000 rpm, 4℃,离心15min。
4、取上清,加500 ul氯仿,抽提2次。
5、取上清,加500 ul 异丙醇,-20 ℃沉淀30 min。
6、12000 rpm离心10 min,1ml 70 %乙醇漂洗。
7、12000 rpm离心5 min,弃上清。室温晾干10 min。
8、30 ul ddH2O 溶解。
4楼2013-05-29 10:43:21
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754122910

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉亮带应该是RNA不是DNA,楼主检查一下你的试剂盒是否存在问题,基因组貌似没有提取出来,建议换个MARKER在跑一次试一下,不行就要从新提取了
5楼2014-04-22 21:13:00
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