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panl234

银虫 (正式写手)

[求助] 基因组DNA电泳图,求高手讲解!!! 已有1人参与

这是我从293细胞中提取的基因组DNA电泳图(见附件),marker是DL2000。我看了别人的电泳结果,都是很高的位置,从上向下弥散,为什么我的结果正好相反,片段总是很小,从下向上弥散?而且在每个泳道的两个边缘有弥散的细纹?基因组DNA应该是很大的片段啊!求高手指导~~~
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  • 附件 1 : 20130515.Tif
  • 2013-05-28 21:29:21, 1.25 M

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panl234

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-05-29 09:20:46
很明显 DNA降解严重 最下面的可能是小RNA  考虑提DNA步骤没注意好 把你的步骤发过来

1、10 cm-plate细胞,200 ul SDS裂解buffer冰上裂解10min。
2、8 ul 5M NaCl 及10 ul 蛋白酶K,65 ℃消化过夜。
3、200 ul TE稀释SDS,加500 ul 酚:氯仿:异戊醇混合物,剧烈混匀,RT,5 min,12000 rpm, 4℃,离心15min。
4、取上清,加500 ul氯仿,抽提2次。
5、取上清,加500 ul 异丙醇,-20 ℃沉淀30 min。
6、12000 rpm离心10 min,1ml 70 %乙醇漂洗。
7、12000 rpm离心5 min,弃上清。室温晾干10 min。
8、30 ul ddH2O 溶解。
4楼2013-05-29 10:43:21
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