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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我提取的DNA电泳图，该怎么改进呢
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

[求助] 我提取的DNA电泳图，该怎么改进呢

我提取的DNA其260/280和260/230纯度达到1.8左右，这个是我的电泳图，拖尾好严重啊，请问如何改进呢，我用的0.6%的琼脂糖胶跑60V，1h。
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科研真辛苦！
1楼 2011-10-15 11:12:02
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doublehelix

木虫 (著名写手)
★
西瓜(金币+1): 同感！ 2011-10-15 20:12:44
貌似提的DNA已降解或破坏了
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2楼2011-10-15 16:30:22
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春草2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 鼓励应助！ 2011-10-15 23:29:50
树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-16 11:26:26
是genomic DNA 吗？
如果是：那么是什么酵母吗还是植物抑或真菌等？怎么裂解的？
DNA一般不容易降解吧。是不是含有杂质？
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3楼2011-10-15 20:47:43
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

【答案】应助回帖

树宝宝zyx(金币+4): 2011-10-16 11:28:15
研磨充分一些，然后增加抽提次数，貌似产率也不高，此外胶浓度可以大点，电压高点，少跑一会儿
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不孝有三，读博为大！
4楼2011-10-16 10:54:02
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)
西瓜: 有这个可能。以后样品最好分装成小份，用多少拿多少，避免反复冻融。 2011-10-16 12:50:22
引用回帖:
3楼: Originally posted by 春草2 at 2011-10-15 20:47:43:
是genomic DNA 吗？
如果是：那么是什么酵母吗还是植物抑或真菌等？怎么裂解的？
DNA一般不容易降解吧。是不是含有杂质？

是提取的太湖底泥基因组DNA，提了有半个多月了，存放在-20°C，就是经常拿出来使用，会不会因为冻融次数太多所以降解了呢？
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科研真辛苦！
5楼2011-10-16 11:26:07
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yidaqunyan at 2011-10-16 10:54:02:
研磨充分一些，然后增加抽提次数，貌似产率也不高，此外胶浓度可以大点，电压高点，少跑一会儿

80V跑的，左边是0.6%的胶，右边是1%，看是不是低浓度的更好点啊？
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科研真辛苦！
6楼2011-10-16 11:40:58
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春草2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
树宝宝zyx(金币+4): 2011-10-16 20:01:57
西瓜(金币+4): Good 2011-10-19 18:40:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by 树宝宝zyx at 2011-10-16 11:26:07:
是提取的太湖底泥基因组DNA，提了有半个多月了，存放在-20°C，就是经常拿出来使用，会不会因为冻融次数太多所以降解了呢？

呵呵。。
    我觉得啊。在抽genomic DNA的时候，你不可能保证不会对里面的基因进行破坏。像tip头，这些东西。弄啊弄。很容易使染色体遭受到破坏。所以抽提的时候，多注意尽量不要对DNA产生破坏。
    还有，genomic DNA会产生降解，也不是没有可能。但是我觉得没有必要，把它作为主要的原因去考虑。不放心的话在溶genomic DNA的时候你可以放点RNAase。除非有杂质污染。实际上一般如果常用的话。genomic DNA 摆4℃就可以了。
    还有，同时你抽出来的实验室干嘛的？是用来pcr还是做Sourthern blot等等？到网上去查一下质料。看一下，这样的genomic DNA适合不适合。如果可以的话，就去做吧，不要耽误了后面的实验。如果对于如何提高你的genomic DNA的质量，可以慢慢考虑。
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7楼2011-10-16 15:08:20
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jianghuqixia

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DNA有拖尾现象啊！可能是操作过程中，动作叫大，可以适当温柔点！方法的选择上也要适当！
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微生物发酵
8楼2011-10-16 18:25:51
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longyh6411

金虫 (小有名气)
操作的时候温柔点吧，估计是动作太大了，还有就是试试把枪头剪掉一些
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9楼2011-10-16 23:48:16
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zhongmianhua

木虫 (小有名气)
明显是降解了吧，你看你两种胶跑电泳；几条带同样是没有的，跑得好的同样很清晰
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体会生活
10楼2011-10-17 00:22:50
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