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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

[求助] 我提取的DNA电泳图,该怎么改进呢

我提取的DNA其260/280和260/230纯度达到1.8左右,这个是我的电泳图,拖尾好严重啊,请问如何改进呢,我用的0.6%的琼脂糖胶跑60V,1h。
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科研真辛苦!
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doublehelix

木虫 (著名写手)


西瓜(金币+1): 同感! 2011-10-15 20:12:44
貌似提的DNA已降解或破坏了
2楼2011-10-15 16:30:22
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春草2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


wanhscn(金币+1): 鼓励应助! 2011-10-15 23:29:50
树宝宝zyx(金币+2): 2011-10-16 11:26:26
是genomic DNA 吗?
如果是:那么是什么酵母吗还是植物抑或真菌等?怎么裂解的?
DNA一般不容易降解吧。是不是含有杂质?
3楼2011-10-15 20:47:43
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yidaqunyan

木虫 (正式写手)

博士

【答案】应助回帖

树宝宝zyx(金币+4): 2011-10-16 11:28:15
研磨充分一些,然后增加抽提次数,貌似产率也不高,此外胶浓度可以大点,电压高点,少跑一会儿
不孝有三,读博为大!
4楼2011-10-16 10:54:02
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

西瓜: 有这个可能。以后样品最好分装成小份,用多少拿多少,避免反复冻融。 2011-10-16 12:50:22
引用回帖:
3楼: Originally posted by 春草2 at 2011-10-15 20:47:43:
是genomic DNA 吗?
如果是:那么是什么酵母吗还是植物抑或真菌等?怎么裂解的?
DNA一般不容易降解吧。是不是含有杂质?

是提取的太湖底泥基因组DNA,提了有半个多月了,存放在-20°C,就是经常拿出来使用,会不会因为冻融次数太多所以降解了呢?
科研真辛苦!
5楼2011-10-16 11:26:07
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树宝宝zyx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yidaqunyan at 2011-10-16 10:54:02:
研磨充分一些,然后增加抽提次数,貌似产率也不高,此外胶浓度可以大点,电压高点,少跑一会儿

80V跑的,左边是0.6%的胶,右边是1%,看是不是低浓度的更好点啊?


科研真辛苦!
6楼2011-10-16 11:40:58
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春草2

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
树宝宝zyx(金币+4): 2011-10-16 20:01:57
西瓜(金币+4): Good 2011-10-19 18:40:28
引用回帖:
5楼: Originally posted by 树宝宝zyx at 2011-10-16 11:26:07:
是提取的太湖底泥基因组DNA,提了有半个多月了,存放在-20°C,就是经常拿出来使用,会不会因为冻融次数太多所以降解了呢?

呵呵。。
    我觉得啊。在抽genomic DNA的时候,你不可能保证不会对里面的基因进行破坏。像tip头,这些东西。弄啊弄。很容易使染色体遭受到破坏。所以抽提的时候,多注意尽量不要对DNA产生破坏。
    还有,genomic DNA会产生降解,也不是没有可能。但是我觉得没有必要,把它作为主要的原因去考虑。不放心的话在溶genomic DNA的时候你可以放点RNAase。除非有杂质污染。实际上一般如果常用的话。genomic DNA 摆4℃就可以了。
    还有,同时你抽出来的实验室干嘛的?是用来pcr还是做Sourthern blot等等?到网上去查一下质料。看一下,这样的genomic DNA适合不适合。如果可以的话,就去做吧,不要耽误了后面的实验。如果对于如何提高你的genomic DNA的质量,可以慢慢考虑。
7楼2011-10-16 15:08:20
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jianghuqixia

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DNA有拖尾现象啊!可能是操作过程中,动作叫大,可以适当温柔点!方法的选择上也要适当!
微生物发酵
8楼2011-10-16 18:25:51
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longyh6411

金虫 (小有名气)

操作的时候温柔点吧,估计是动作太大了,还有就是试试把枪头剪掉一些
9楼2011-10-16 23:48:16
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zhongmianhua

木虫 (小有名气)

明显是降解了吧,你看你两种胶跑电泳;几条带同样是没有的,跑得好的同样很清晰
体会生活
10楼2011-10-17 00:22:50
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