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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组DNA电泳图，求高手讲解！！！
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panl234

银虫 (正式写手)

[求助] 基因组DNA电泳图，求高手讲解！！！ 已有1人参与

这是我从293细胞中提取的基因组DNA电泳图（见附件），marker是DL2000。我看了别人的电泳结果，都是很高的位置，从上向下弥散，为什么我的结果正好相反，片段总是很小，从下向上弥散？而且在每个泳道的两个边缘有弥散的细纹？基因组DNA应该是很大的片段啊！求高手指导~~~
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    • 2013-05-28 21:29:21, 1.25 M

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1楼 2013-05-28 21:33:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-29 08:36:23
样品是否消化了RNA，感觉下面的小带是未降解掉的RNA。上面也有点东西，应该是基因组DNA了，你试试消化了RNA后再电泳看一下。
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2楼2013-05-29 07:24:17
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
panl234(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 18:50:23
很明显 DNA降解严重 最下面的可能是小RNA  考虑提DNA步骤没注意好 把你的步骤发过来
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3楼2013-05-29 09:20:46
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panl234

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-05-29 09:20:46
很明显 DNA降解严重 最下面的可能是小RNA  考虑提DNA步骤没注意好 把你的步骤发过来

1、10 cm-plate细胞，200 ul SDS裂解buffer冰上裂解10min。
2、8 ul 5M NaCl 及10 ul 蛋白酶K，65 ℃消化过夜。
3、200 ul TE稀释SDS，加500 ul 酚：氯仿：异戊醇混合物，剧烈混匀，RT，5 min，12000 rpm， 4℃，离心15min。
4、取上清，加500 ul氯仿，抽提2次。
5、取上清，加500 ul 异丙醇，-20 ℃沉淀30 min。
6、12000 rpm离心10 min，1ml 70 %乙醇漂洗。
7、12000 rpm离心5 min，弃上清。室温晾干10 min。
8、30 ul ddH2O 溶解。
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4楼2013-05-29 10:43:21
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754122910

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉亮带应该是RNA不是DNA,楼主检查一下你的试剂盒是否存在问题，基因组貌似没有提取出来，建议换个MARKER在跑一次试一下，不行就要从新提取了
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5楼2014-04-22 21:13:00
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