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同源克隆、简并引物、RACE 已有1人参与
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最近在做同源克隆，下载了同源基因的CDS，通过核苷酸比对设计了简并引物，在基因组DNA上扩增得到预期片段，测序、比对结果显示为目的片段。 疑问一：cDNA进行扩增，同一对引物得到片段比基因组短了100多bp,心想可能有内含子吧，结果测序结果显示根本就不是目的基因。这是为什么呢？ 疑问二：在基因组得到的核心片段上设计了RACE的基因特异性引物，通过RACE的两轮PCR得到5‘-RACE产物测序，结果在序列上找不到我的特异性引物，序列无法与核心片段拼接，NCBI上比对发现这又是另外一个基因。心塞了，为什么会这样子呢？  求大神指导指导！ |
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yingheqian
金虫 (著名写手)
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2楼2015-05-16 13:30:53