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依然自然

新虫 (小有名气)

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[求助] RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？已有10人参与

我在提取RNA时，取样0.1g，新鲜样品现磨，用的Trizol提取法。结果RNA的浓度可以，2.0>A260/280>1.8，A260/230>2.0。但跑胶时没有RNA出现，只有点样孔很亮，和DNA Marker条带（图1）。跑胶时采用点样体系：DNA Loading Buffer、DNA Marker、Gel stain（核酸染料）各2ul，上样量2ul。跑胶条件：U=100V、I 随意，时间12min。出现问题之后，我采用大电泳槽电泳，电泳条件为：U=220V、I 随意、时间15min。结果是RNA拖尾，DNA Marker更清楚（图2）。请问这种问题可能是由于什么原因造成的？谁有好主意接下来我该做些什么测试才能找出问题和解决问题？谢谢！

图1.jpg

RNA提取时，浓度4252.2，A260/280=1.99，但电泳跑不出RNA，原因是？-1

图2.jpg

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生命就如旅行。。。。所以要一直笑着

1楼 2015-05-13 10:52:51

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引用回帖:

4楼: Originally posted by Neo2000 at 2015-05-13 18:28:00
都没提出来，测OD有什么用

初提，很多不懂，就按程序走了一遍看看哪里会错，后面好加以注意。你说的没提出来，是看胶就能看出来的是不？我提的步骤：
1.取0.1g新鲜叶片，液氮研磨，加1ml Trizol于研钵中，待快溶解时再研磨，后将研磨液移至预冷离心管，加200ul氯仿，剧烈震荡15s，室温静置10min，13000r/min、4、15min。
2.移上清，加500ul预冷的异丙醇，剧烈震荡15s、4、静置10min。4、13000r/min、10min。
3.弃上清，加500ul 75%乙醇，上下震荡15s，4、13000r/min、15min。
4.弃上清，风干75%乙醇，加100ulDEPC-water 55 溶解5min.
5.加130ul 酸性酚，4、13000r/min、15min。
6.移上清至新离心管，加入等体积氯仿，4、13000r/min、15min。
7.移上清至新离心管，加1/10体积的NaAc、2倍体积的100%乙醇，4、13000r/min、15min。
8.弃上清，加500ul 75%乙醇，上下震荡15s，4、13000r/min、15min。
9.弃上清，风干75%乙醇，加10ulDEPC-water 55 溶解5min.
10.取2ul测浓度，2ul点样。
以上是我的实验过程，麻烦帮我看看哪里出错了？我提的是多酚多糖类植物的叶片RNA。谢谢指点！