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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)

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2 是神马情况？已有1人参与

好质量的RNA 260/280值应该在1.9-2.0，
但是最近提取的RNA A260/280>2，A260/230>2，
请问各位虫友，这是个神马情况？

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RNA提取

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一手生存，一手梦想

1楼 2013-05-09 09:09:05

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chinatiger

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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sunzhengwang(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:00:10
gyesang: 回帖置顶 2013-05-10 13:00:24
sunzhengwang: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-10 15:16:13
1949stone: MolEPI+1, good 2013-05-11 20:30:21

如果在2.1之上，说明可能存在DNA污染。此外，单纯看比值意义不大，下列文字仅供参考：
1. A260nm 是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为 0.1 至 1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于 0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。 DNA 样品的 A260 吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于 0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1）；

2. A280nm, A270nm 是蛋白最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，纯 RNA 为 2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5 相当于 50％蛋白质/DNA 溶液.酚的最大吸收峰在 270nm。

3. A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值为 2.5。若比值小于 2.0 标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230 产生负值主要是由于在很低 DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230 的负值会被校正。

4. A320nm 或 A340nm 为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，标明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A320一般是 0。

5. A260/A280和A260/A230 是核酸纯度的指示值。纯度好的DNA或RNA，在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（胍盐）等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。

当 0.5％BSA蛋白质污染时，蛋白污染会导致260和280的数值都下降，其净结果是260/280比值下降，但260/280的比值变化并不显著，正如分子克隆3所说。但蛋白残留会导致230的数值显著上升，显著影响260/230的比值。也就是说，如果RNA样品的260/280＝1.7，260 /230＝0.5，那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留，而是蛋白残留.

其他：
用分光光度计测量RNA时，用水而不是用TE 缓冲液稀释RNA样品会造成A260/A280比值下降。原因是低离子强度和低pH溶液会增加280 nm处的光吸收值。
加氯仿离心后取上清的时候千万不要贪多，那样就很容易被蛋白污染，所以现在一般取400ul左右。
当260/230<1时，只有两种情况。一是胍盐污染，二是蛋白污染。