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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA A260/280>2 是神马情况？
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stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sunzhengwang(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 12:24:31
我想是你的洗脱用了TEｂｕｆｆｅｒ了，这样导致Ｒ会稍微变高，２.２之类都是可以接受的
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11楼2013-05-10 10:54:47
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有时间分光光度计骗人无底线
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但愿人长久
12楼2013-05-10 10:57:48
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-09 22:03:31
我这里量出来一直是2.1的样子, 没问题的.

这说明纯度还是很高的，是吗？
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13楼2013-05-10 11:01:59
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louisa俊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这个得看各个波长代表什么，我们这一般A260/A280在1.7几，数据还是可以用的。但是超过2，我就不知道了。。你是用试剂盒提的吗？？你再结合试剂盒说明书看看。。。。
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14楼2013-05-10 11:31:41
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chinatiger

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sunzhengwang(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:00:10
gyesang: 回帖置顶 2013-05-10 13:00:24
sunzhengwang: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-10 15:16:13
1949stone: MolEPI+1, good 2013-05-11 20:30:21
如果在2.1之上，说明可能存在DNA污染。此外，单纯看比值意义不大，下列文字仅供参考：
1. A260nm 是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为 0.1 至 1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使 之在此范围内；如果吸光度小于 0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。 DNA 样品的 A260 吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于 0.1，其值才 有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1）；

2. A280nm, A270nm 是蛋白最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA 的 A260/A280 比值为 1.8，纯 RNA 为 2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5 相当于 50％ 蛋白质/DNA 溶液.酚的最大吸收峰在 270nm。

3. A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯 DNA 和 RNA 的 A260/A230 比值为 2.5。若比值小于 2.0 标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230 产生 负值主要是由于在很低 DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样 品的稀释度，A230 的负值会被校正。

4. A320nm 或 A340nm 为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，标明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A320一般是 0。

5. A260/A280和A260/A230 是核酸纯度的指示值。纯度好的DNA或RNA，在pH7-8.5 下A260 / A280的比值应该在2.0 或2.5。纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（胍盐）等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。

当 0.5％BSA蛋白质污染时，蛋白污染会导致260和280的数值都下降，其净结果是260/280比值下降，但260/280的比值变化并不显著，正如分子克隆3所说。但蛋白残留会导致230的数值显著上升，显著影响260/230的比值。也就是说，如果RNA样品的260/280＝1.7，260 /230＝0.5，那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留，而是蛋白残留.

其他：
用分光光度计测量RNA时，用水而不是用TE 缓冲液稀释RNA样品会造成A260/A280比值下降。原因是低离子强度和低pH溶液会增加280 nm处的光吸收值。
加氯仿离心后取上清的时候千万不要贪多 ，那样就很容易被蛋白污染，所以现在一般取400ul左右。
当260/230<1时，只有两种情况。一是胍盐污染，二是蛋白污染。
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15楼2013-05-10 11:39:21
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springnamao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2013-05-10 10:50:29
确定没错？？？...

应该没错，要么就是记反了
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生如夏花
16楼2013-05-10 15:00:34
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-05-10 10:54:47
我想是你的洗脱用了TEｂｕｆｆｅｒ了，这样导致Ｒ会稍微变高，２.２之类都是可以接受的

一般在2.04左右徘徊
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一手生存，一手梦想
17楼2013-05-10 15:18:56
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by louisa俊 at 2013-05-10 11:31:41
这个得看各个波长代表什么，我们这一般A260/A280在1.7几，数据还是可以用的。但是超过2，我就不知道了。。你是用试剂盒提的吗？？你再结合试剂盒说明书看看。。。。

trizol提的
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一手生存，一手梦想
18楼2013-05-10 15:19:30
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伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
260/280>2.0 也有可能是RNA发生降解了，内部基团外露，导致对260nm波长的光吸收值增大。楼主电泳结果怎么样？
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对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
19楼2013-05-11 20:24:00
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sunzhengwang

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-05-11 20:24:00
260/280>2.0 也有可能是RNA发生降解了，内部基团外露，导致对260nm波长的光吸收值增大。楼主电泳结果怎么样？

电泳结果还不错，
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一手生存，一手梦想
20楼2013-06-17 13:43:24
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