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分光光度计A260/A280 A260/A230 比值所代表意义
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虽然这篇文章有些小问题第二点说纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0，但在第五点又说是2.0与2.5？但是其他地方的分析还是能够带来一些帮助的。 其实网上也很多A260/A280的区间，1.6-2.0；1.6-1.8；1.7-1.9；1.8-2.0但他们都没有明确溶液的状态，是TE还是水？pH值多少？0.1个pH值的改变能够引起A260/A280较大幅度的改变。在qiagen的DNA实验方案及应用里有两处提到DNA纯度问题，第一个是3/16：在10mM Tris-Cl、pH8.5条件下，纯净的DNA的A260/A280比率为1.8~2.0之间。第二处是10/16：在10mM Tris-Cl、pH7.5条件下，纯净的DNA的A260/A280比率为1.7~1.9之间。但是qiagen里没有具体提到A260/A230的情况。不过在invitrogen的PureLink（TM）Genomic DNA Kits中有提到他们的标准是：A260/A280比率为1.7~1.9同时A260/A230在2.0~2.5但是血液样本偏低些是1.8以上。 但平时我们做实验也会发现其实在A260/A280值稍好的情况下，A260/A230不在这个区间对PCR似乎也未有大的影响。PCR体系本身就有一定的抗污染能力，而且一般上样量少，所以影响有限。如果是乙肝这类上样量至少20ul或者占体系一半的，可能就会有相对明显的效果。 最后吐槽一个，无论是Tiangen还是qiagen或其他的TE，在我这的紫外分光光度计测OD230均很高。qiagen的说明书还会明确说使用前1比3稀释后测OD，但是Tiagen完全不提，在不稀释的情况下基本都是一堆++++，Tiangen的还说他们的TE就是在这款机器上不行，这。。。。。。不知道各位是否也有这情况，还是真如他们所说。。。。。 |
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2015-08-18 09:30:30, 390.76 K
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