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依然自然

新虫 (小有名气)

[求助] RNA提取时,浓度4252.2,A260/280=1.99,但电泳跑不出RNA,原因是? 已有10人参与

我在提取RNA时,取样0.1g,新鲜样品现磨,用的Trizol提取法。结果RNA的浓度可以,2.0>A260/280>1.8,A260/230>2.0。但跑胶时没有RNA出现,只有点样孔很亮,和DNA Marker条带(图1)。跑胶时采用点样体系:DNA Loading Buffer、DNA Marker、Gel stain(核酸染料)各2ul,上样量2ul。跑胶条件:U=100V、I 随意,时间12min。出现问题之后,我采用大电泳槽电泳,电泳条件为:U=220V、I 随意、时间15min。结果是RNA拖尾,DNA Marker更清楚(图2)。请问这种问题可能是由于什么原因造成的?谁有好主意接下来我该做些什么测试才能找出问题和解决问题?谢谢!

RNA提取时,浓度4252.2,A260/280=1.99,但电泳跑不出RNA,原因是?
图1.jpg


RNA提取时,浓度4252.2,A260/280=1.99,但电泳跑不出RNA,原因是?-1
图2.jpg
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依然自然

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-05-13 15:43:17
加样孔很亮,应该是你的RNA中有杂蛋白污染。

我提取的植物是一种多酚多糖的,听我师姐的意思是RNA被一种蛋白或者糖类包裹着,跑不出来,但她也不知道如何改进。请问如何有效的改进我的实验?  谢谢了!
生命就如旅行。。。。所以要一直笑着
3楼2015-05-13 18:22:19
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
依然自然(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-15 19:33:49
加样孔很亮,应该是你的RNA中有杂蛋白污染。
2楼2015-05-13 15:43:17
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
都没提出来,测OD有什么用

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-05-13 18:28:00
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 依然自然 at 2015-05-13 18:22:19
我提取的植物是一种多酚多糖的,听我师姐的意思是RNA被一种蛋白或者糖类包裹着,跑不出来,但她也不知道如何改进。请问如何有效的改进我的实验?  谢谢了!...

试试氯化锂沉淀法,文献中也有很多改良氯化锂法提多酚多糖植物RNA的操作步骤,或是买专用于提取多酚多糖植物RNA的试剂盒。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2015-05-13 19:25:12
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