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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR溶解曲线双峰
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)

[求助] qPCR溶解曲线双峰 已有2人参与

第一次做qPCR，溶解曲线出现双峰。拷贝数10^9和10^8为单峰，Tm值87℃左右，10^7开始出现双峰，10^5为单峰，但Tm值85℃左右，试了几个样品，样品也都是单峰，Tm值也在87℃左右。试过升高退火温度，但没有效果。请教各位这是什么原因啊？多谢啦~

qPCR溶解曲线双峰
IMG20150420173001.jpg
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1楼 2015-04-29 19:18:21
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
唯小艺SMQH: 金币+2, ★有帮助 2015-04-29 21:51:24
检测过你的引物没？是否特意扩增？
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2楼2015-04-29 19:41:20
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-04-29 19:41:20
检测过你的引物没？是否特意扩增？

我对qPCR的产物跑过胶，条带位置是一致的，而且只有一条条带~
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3楼2015-04-29 20:01:04
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晞朔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 唯小艺SMQH at 2015-04-29 20:01:04
我对qPCR的产物跑过胶，条带位置是一致的，而且只有一条条带~...

不知道你的反应程序。如果引物特异，那你就得参考你所做材料类似文献的反应程序了。祝好
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4楼2015-04-29 20:26:08
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-04-29 20:26:08
不知道你的反应程序。如果引物特异，那你就得参考你所做材料类似文献的反应程序了。祝好...

谢谢！
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5楼2015-04-29 20:31:17
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
唯小艺SMQH: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-04-29 21:51:08
及时Agrose显示的一条带，但也可能产物是差异很小的两条带，在QPCR的时候就会出现这样结果。
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6楼2015-04-29 20:42:50
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-29 20:42:50
及时Agrose显示的一条带，但也可能产物是差异很小的两条带，在QPCR的时候就会出现这样结果。

谢谢！那我应该怎么做呢？
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7楼2015-04-29 21:16:02
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yingheqian

金虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 唯小艺SMQH at 2015-04-29 21:16:02
谢谢！那我应该怎么做呢？...

你把PCR产物跑一下PAGE胶看看，浓度略高一点，跑的时间也比较长，如果还是一条带，就按照4楼说的。
另外就是重新设计引物了。
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8楼2015-04-29 21:39:19
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-29 21:39:19
你把PCR产物跑一下PAGE胶看看，浓度略高一点，跑的时间也比较长，如果还是一条带，就按照4楼说的。
另外就是重新设计引物了。...

谢谢！
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9楼2015-04-29 21:50:51
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