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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)

[求助] qPCR溶解曲线双峰 已有2人参与

第一次做qPCR,溶解曲线出现双峰。拷贝数10^9和10^8为单峰,Tm值87℃左右,10^7开始出现双峰,10^5为单峰,但Tm值85℃左右,试了几个样品,样品也都是单峰,Tm值也在87℃左右。试过升高退火温度,但没有效果。请教各位这是什么原因啊?多谢啦~

qPCR溶解曲线双峰
IMG20150420173001.jpg
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
唯小艺SMQH: 金币+2, 有帮助 2015-04-29 21:51:24
检测过你的引物没?是否特意扩增?
2楼2015-04-29 19:41:20
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-04-29 19:41:20
检测过你的引物没?是否特意扩增?

我对qPCR的产物跑过胶,条带位置是一致的,而且只有一条条带~
3楼2015-04-29 20:01:04
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晞朔

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 唯小艺SMQH at 2015-04-29 20:01:04
我对qPCR的产物跑过胶,条带位置是一致的,而且只有一条条带~...

不知道你的反应程序。如果引物特异,那你就得参考你所做材料类似文献的反应程序了。祝好
4楼2015-04-29 20:26:08
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-04-29 20:26:08
不知道你的反应程序。如果引物特异,那你就得参考你所做材料类似文献的反应程序了。祝好...

谢谢!
5楼2015-04-29 20:31:17
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
唯小艺SMQH: 金币+4, ★★★很有帮助 2015-04-29 21:51:08
及时Agrose显示的一条带,但也可能产物是差异很小的两条带,在QPCR的时候就会出现这样结果。
6楼2015-04-29 20:42:50
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-29 20:42:50
及时Agrose显示的一条带,但也可能产物是差异很小的两条带,在QPCR的时候就会出现这样结果。

谢谢!那我应该怎么做呢?
7楼2015-04-29 21:16:02
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yingheqian

金虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 唯小艺SMQH at 2015-04-29 21:16:02
谢谢!那我应该怎么做呢?...

你把PCR产物跑一下PAGE胶看看,浓度略高一点,跑的时间也比较长,如果还是一条带,就按照4楼说的。
另外就是重新设计引物了。
8楼2015-04-29 21:39:19
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唯小艺SMQH

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-29 21:39:19
你把PCR产物跑一下PAGE胶看看,浓度略高一点,跑的时间也比较长,如果还是一条带,就按照4楼说的。
另外就是重新设计引物了。...

谢谢!
9楼2015-04-29 21:50:51
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