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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » QPCR阴性对照出峰怎么办？
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忧伤的萤火虫

银虫 (初入文坛)

[交流] QPCR阴性对照出峰怎么办？ 已有2人参与

做QPCR阴性对照出峰怎么办？是DNA污染还是有别的什么原因呢？数据还能用吗？是不是可以在处理数据的时候把阴性对照的值减掉就行了呢？求大神指导
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比方法更重要的是相信一件事的力量
1楼 2014-08-24 10:51:28
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是什么样的峰？很微弱的峰？
若峰值太高，则要考虑DNA污染，
若非常微弱，可选择THRESHOLD值去掉。
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2楼2014-08-24 11:43:13
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忧伤的萤火虫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2014-08-24 11:43:13
是什么样的峰？很微弱的峰？
若峰值太高，则要考虑DNA污染，
若非常微弱，可选择THRESHOLD值去掉。

ct值和样品接近了都，现在怀疑是污染了，单不知道具体是那块出了问题。这次的数据是不是就不能用了呢？  谢谢解答
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比方法更重要的是相信一件事的力量
3楼2014-08-24 11:48:31
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 忧伤的萤火虫 at 2014-08-24 11:48:31
ct值和样品接近了都，现在怀疑是污染了，单不知道具体是那块出了问题。这次的数据是不是就不能用了呢？  谢谢解答...

把阴性对照换掉，用新的阴性对照。
我原来也遇到过类似状况，最后发现时稀释样品的水的问题，最终用从公司买的水就解决了。
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4楼2014-08-24 15:15:29
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忧伤的萤火虫

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2014-08-24 15:15:29
把阴性对照换掉，用新的阴性对照。
我原来也遇到过类似状况，最后发现时稀释样品的水的问题，最终用从公司买的水就解决了。...

好的  我试试看 谢谢哈
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比方法更重要的是相信一件事的力量
5楼2014-08-24 16:26:29
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johnkm66

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-25 22:48:18
这种情况很大可能是PCR产物污染。最好的处理方法是用UDG酶处理，方法如下：第一次实验时，加入dUTP，第二次PCR之前，用UDG酶处理后再PCR。可以考虑采用带UNG防污染的qPCR试剂盒。
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6楼2014-08-25 13:02:42
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