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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何构建PCR反应体系、PCR反应条件
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天宇201266

金虫 (正式写手)

[求助] 如何构建PCR反应体系、PCR反应条件 已有5人参与

本人刚接触PCR，不知道PCR反应体系以及PCR反应条件如何设定，以及所依据的原理，求指导，谢谢，比如50ul的反应体系，模板、引物、缓冲液、镁离子、水的量是依据什么来选定的，求高手指导，谢谢
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在路上。。。
1楼 2015-04-24 19:41:13
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

草溪河

铁虫 (著名写手)
这个嘛，其实在网上一搜一大把，还可买PCR MIX，照说明书就行
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2楼2015-04-24 23:39:47
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-25 23:28:17
天宇201266: 金币+1, ★有帮助 2015-04-27 13:34:58
一般需要模板引物就行了。现在dntp，taq，mg2+都是预混型的。市场简称mix。50ul，正常1ul模板，引物各1ul，水22，mix25

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3楼2015-04-25 10:57:01
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普通回帖

neckey

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你做PCR的目的是什么？如果有相关的试剂盒的话可以参考该试剂盒的说明书，一般说明书里有建议的反应体系，也可以问问实验室的其他小伙伴，也许他们知道。希望能帮到你，我也只是一个学徒
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4楼2015-04-25 11:30:01
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个也来这问？有这个时间随便找篇文献，里面都有了
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5楼2015-04-25 12:14:34
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天宇201266

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-25 12:14:34
这个也来这问？有这个时间随便找篇文献，里面都有了

我随便找了两篇文献，也没有将如何根据自己的产物片段来构建PCR反应体系跟反应条件的，找了三篇才找到，所以你说随便找一篇也TM扯犊子
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在路上。。。
6楼2015-04-25 15:56:58
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天宇201266: 金币+5, ★有帮助 2015-04-27 10:58:25
天宇201266: 金币+1 2015-04-27 13:35:31
PCR体系和反应条是你所用的酶来定的，说明书上都有的，你能定的一个就是反应的退火温度，那是根据引物来决定的。
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7楼2015-04-26 19:18:23
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天宇201266

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 天地一微尘 at 2015-04-26 19:18:23
PCR体系和反应条是你所用的酶来定的，说明书上都有的，你能定的一个就是反应的退火温度，那是根据引物来决定的。

谢谢

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在路上。。。
8楼2015-04-26 20:19:49
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天宇201266

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 天地一微尘 at 2015-04-26 19:18:23
PCR体系和反应条是你所用的酶来定的，说明书上都有的，你能定的一个就是反应的退火温度，那是根据引物来决定的。

谢谢

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在路上。。。
9楼2015-04-26 20:20:20
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 天宇201266 at 2015-04-26 20:19:49
谢谢
...

不客气。
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10楼2015-04-27 08:18:08
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