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天宇201266

金虫 (正式写手)

[求助] 如何构建PCR反应体系、PCR反应条件已有5人参与

本人刚接触PCR,不知道PCR反应体系以及PCR反应条件如何设定,以及所依据的原理,求指导,谢谢,比如50ul的反应体系,模板、引物、缓冲液、镁离子、水的量是依据什么来选定的,求高手指导,谢谢
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在路上。。。
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草溪河

铁虫 (著名写手)

这个嘛,其实在网上一搜一大把,还可买PCR MIX,照说明书就行
2楼2015-04-24 23:39:47
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-25 23:28:17
天宇201266: 金币+1, 有帮助 2015-04-27 13:34:58
一般需要模板引物就行了。现在dntp,taq,mg2+都是预混型的。市场简称mix。50ul,正常1ul模板,引物各1ul,水22,mix25

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-04-25 10:57:01
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普通回帖

neckey

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你做PCR的目的是什么?如果有相关的试剂盒的话可以参考该试剂盒的说明书,一般说明书里有建议的反应体系,也可以问问实验室的其他小伙伴,也许他们知道。希望能帮到你,我也只是一个学徒
4楼2015-04-25 11:30:01
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yingheqian

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个也来这问?有这个时间随便找篇文献,里面都有了
5楼2015-04-25 12:14:34
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天宇201266

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by yingheqian at 2015-04-25 12:14:34
这个也来这问?有这个时间随便找篇文献,里面都有了

我随便找了两篇文献,也没有将如何根据自己的产物片段来构建PCR反应体系跟反应条件的,找了三篇才找到,所以你说随便找一篇也TM扯犊子
在路上。。。
6楼2015-04-25 15:56:58
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
天宇201266: 金币+5, 有帮助 2015-04-27 10:58:25
天宇201266: 金币+1 2015-04-27 13:35:31
PCR体系和反应条是你所用的酶来定的,说明书上都有的,你能定的一个就是反应的退火温度,那是根据引物来决定的。
7楼2015-04-26 19:18:23
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天宇201266

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 天地一微尘 at 2015-04-26 19:18:23
PCR体系和反应条是你所用的酶来定的,说明书上都有的,你能定的一个就是反应的退火温度,那是根据引物来决定的。

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
在路上。。。
8楼2015-04-26 20:19:49
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天宇201266

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 天地一微尘 at 2015-04-26 19:18:23
PCR体系和反应条是你所用的酶来定的,说明书上都有的,你能定的一个就是反应的退火温度,那是根据引物来决定的。

谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
在路上。。。
9楼2015-04-26 20:20:20
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 天宇201266 at 2015-04-26 20:19:49
谢谢
...

不客气。
10楼2015-04-27 08:18:08
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