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关于原核表达后，WB条带不单一的问题。请大神帮忙！已有2人参与
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最近好不容易表达出蛋白，进入纯化。载体用的pET-32a，有his标签，前几天第一次摇了500ml，尝试挂了ni柱。洗脱下来后跑了电泳。结果如下： 蛋白泳道从左到右依次是：1.M 2.破碎后蛋白上清原液 3.流穿 4.洗脱 5-10分别是20,50,100,200,500mM以及1M咪唑洗脱 maker 从上到下分别是116,66,45,35,25,18,14. 可以看到在50和100mM咪唑浓度时，我的蛋白有被大量洗脱下来。 然后在跑胶的同时，用his抗体做了WB，结果比较奇怪，也希望大家帮我分析一下：   WB我是间隔泳道点样的。M紧挨着是pET-32a空载的上清，然后间隔一个泳道为有我质粒菌的上清。最后一道是第一图的100mM咪唑洗脱。 考染的图只看前六个泳道，第六泳道是第一图的100mM咪唑洗脱跑的。 那么问题来了。his抗体杂出来条带按理说比较单一。为何我的会在目的条带附近出现三个条带呢？是蛋白有降解？还是二硫键错配？ 请大神指导！感激不尽！ |
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