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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western 做不出来
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芳草萋萋79

金虫 (初入文坛)

[求助] western 做不出来 已有2人参与

最近我在做western, 其中同一个指标S要做两种样本A,B，A样本在1:800一抗（abcam）后，做了三次，都是单一条带。B样本同样抗体做了七次，都没有条带。可是B样本同一张膜做另一个抗体C就做出来了，条带也单一。内参都可以做出来。S抗体我怕放久了，也重新配置过两次，也都是同一结果。S指标做realtime pcr和 pcr都显示在B样本中有表达。请问这可能什么原因？与蛋白表达产物延迟有关系吗？谢谢！
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1楼 2014-05-24 10:57:56
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芳草萋萋79

金虫 (初入文坛)
还没人回吗？
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2楼2014-05-24 23:34:42
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
芳草萋萋79: 金币+200, ★★★★★最佳答案, 提供了思路，谢谢 2014-05-26 22:48:40
从楼主给的资料看，我找不出任何破绽。要不楼主再多给点信息？楼主实验水平，应该不在我之下。如果怀疑自己的实验结果，换一个人重复下你的实验。说不定，这是一个重大发现。

多年前，我们实验室通过消减杂交（mRNA水平）得到一个癌症特异性的基因，后来的实验一直检测不到这个基因的蛋白。我的师兄怀疑自己的实验做的不好，就不停的重复。现在我们知道它是一个long noncoding RNA, lncRNA（长链非编码RNA）。要是我们当年能不怀疑自己的实验水平，说不定就能发大文章。
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3楼2014-05-25 07:41:47
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
芳草萋萋79: 金币+45, ★★★很有帮助, 谢谢你的回答 2014-05-26 22:49:14
A和B是否是来自同一种属的样本，如果不是，可能是因为抗体不能识别B样本种属的关系。如果是来自同一种属，只能考虑为样本B中表达含量太低，在WB这个检测水平达不到检测敏感度，表现为阴性结果。
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4楼2014-05-25 23:01:52
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
A和B是什么关系
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5楼2014-05-26 09:40:22
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芳草萋萋79

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-05-26 09:40:22
A和B是什么关系

A和B来自同一种属
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6楼2014-05-26 22:42:31
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芳草萋萋79

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 314300420 at 2014-05-25 23:01:52
A和B是否是来自同一种属的样本，如果不是，可能是因为抗体不能识别B样本种属的关系。如果是来自同一种属，只能考虑为样本B中表达含量太低，在WB这个检测水平达不到检测敏感度，表现为阴性结果。

A，B来自同一种属，pcr条带可以见到表达量还可以
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7楼2014-05-26 22:43:52
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芳草萋萋79

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-25 07:41:47
从楼主给的资料看，我找不出任何破绽。要不楼主再多给点信息？楼主实验水平，应该不在我之下。如果怀疑自己的实验结果，换一个人重复下你的实验。说不定，这是一个重大发现。

多年前，我们实验室通过消减杂交（m ...

这个做不出来的指标别人做western做出来过，只是样品来源不一样. 谢谢你的回答，我再查下资料
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8楼2014-05-26 22:48:07
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