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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 要做western blot的话应该用24孔板还是什么?

如题,实验设计是这样的样品1有9个浓度、样品2有一个浓度、样品2+样品1(9个)、空白组,也就是大概20个组。因为没做过所以不知道样细胞要达到多少才可以做western blot?用24孔板一孔一个组的话得到的最后细胞裂解物的量够用否?
话说24孔板一孔应该放多少细胞来铺板,是不是跟96孔板密度要求应该一样啊?每孔的培养基又该给多少?
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为爱而生
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BioChen

银虫 (正式写手)

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我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:44:44
12孔板,每孔大概能提取到200ug左右的总蛋白,能跑1-2次western。
4楼2014-05-07 12:20:59
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gyesang

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【答案】应助回帖

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我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:41:32
24孔板最后收的蛋白样品比较少,鉴于你分组比较多,你可以用12孔做,每个孔铺大约20万个细胞,细胞长至90%做处理
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-07 00:37:33
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sunrq516516

金虫 (小有名气)

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我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:42:13
12孔我觉得是极限了,一般我们会做6孔板
Permanent head Damage
3楼2014-05-07 07:47:40
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yanxing90

禁虫 (著名写手)

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我听五月天: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:44:58
24孔板确实细胞少了点,除非是长得比较满的细胞。

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-05-07 12:47:15
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-07 12:20:59
12孔板,每孔大概能提取到200ug左右的总蛋白,能跑1-2次western。

铺板后长到底面积%多少可以给药?我的药最高浓度可以使细胞存活率降到对照组的10%左右。谢谢
为爱而生
6楼2014-05-07 22:44:38
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BioChen

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-05-07 22:44:38
铺板后长到底面积%多少可以给药?我的药最高浓度可以使细胞存活率降到对照组的10%左右。谢谢...

非常抱歉,我没有做过药理方面的研究,无法给您回答。
7楼2014-05-08 09:22:27
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-07 00:37:33
24孔板最后收的蛋白样品比较少,鉴于你分组比较多,你可以用12孔做,每个孔铺大约20万个细胞,细胞长至90%做处理

谢谢~我做96孔板都是长到30%-50%给药孵育48h,90%给药会不会太晚了?您说的处理是最后裂解提取吗?给药后我的最高浓度组存活率可能只是对照组的10%,这样的细胞量能提取足够的东西吗?
为爱而生
8楼2014-05-08 09:35:38
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-05-07 07:47:40
12孔我觉得是极限了,一般我们会做6孔板

谢谢,做6孔板的话那您一个组做一个孔?还是?
为爱而生
9楼2014-05-08 09:37:14
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我听五月天

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-07 00:37:33
24孔板最后收的蛋白样品比较少,鉴于你分组比较多,你可以用12孔做,每个孔铺大约20万个细胞,细胞长至90%做处理

啊,还有做12孔板的话每组只做1个孔的话可以吗?
为爱而生
10楼2014-05-08 09:39:11
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