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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 要做western blot的话应该用24孔板还是什么？
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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 要做western blot的话应该用24孔板还是什么？

如题，实验设计是这样的样品1有9个浓度、样品2有一个浓度、样品2+样品1（9个）、空白组，也就是大概20个组。因为没做过所以不知道样细胞要达到多少才可以做western blot？用24孔板一孔一个组的话得到的最后细胞裂解物的量够用否？
话说24孔板一孔应该放多少细胞来铺板，是不是跟96孔板密度要求应该一样啊？每孔的培养基又该给多少？
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为爱而生
1楼 2014-05-06 22:31:00
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BioChen

银虫 (正式写手)

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感谢参与，应助指数 +1
我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:44:44
12孔板，每孔大概能提取到200ug左右的总蛋白，能跑1-2次western。
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4楼2014-05-07 12:20:59
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:41:32
24孔板最后收的蛋白样品比较少，鉴于你分组比较多，你可以用12孔做，每个孔铺大约20万个细胞，细胞长至90%做处理
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2楼2014-05-07 00:37:33
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sunrq516516

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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我听五月天: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:42:13
12孔我觉得是极限了，一般我们会做6孔板
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3楼2014-05-07 07:47:40
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yanxing90

禁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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我听五月天: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-05-07 22:44:58
24孔板确实细胞少了点，除非是长得比较满的细胞。

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5楼2014-05-07 12:47:15
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by BioChen at 2014-05-07 12:20:59
12孔板，每孔大概能提取到200ug左右的总蛋白，能跑1-2次western。

铺板后长到底面积%多少可以给药？我的药最高浓度可以使细胞存活率降到对照组的10%左右。谢谢
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为爱而生
6楼2014-05-07 22:44:38
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BioChen

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 我听五月天 at 2014-05-07 22:44:38
铺板后长到底面积%多少可以给药？我的药最高浓度可以使细胞存活率降到对照组的10%左右。谢谢...

非常抱歉，我没有做过药理方面的研究，无法给您回答。
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7楼2014-05-08 09:22:27
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-07 00:37:33
24孔板最后收的蛋白样品比较少，鉴于你分组比较多，你可以用12孔做，每个孔铺大约20万个细胞，细胞长至90%做处理

谢谢~我做96孔板都是长到30%-50%给药孵育48h，90%给药会不会太晚了？您说的处理是最后裂解提取吗？给药后我的最高浓度组存活率可能只是对照组的10%，这样的细胞量能提取足够的东西吗？
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为爱而生
8楼2014-05-08 09:35:38
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sunrq516516 at 2014-05-07 07:47:40
12孔我觉得是极限了，一般我们会做6孔板

谢谢，做6孔板的话那您一个组做一个孔？还是？
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为爱而生
9楼2014-05-08 09:37:14
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我听五月天

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-07 00:37:33
24孔板最后收的蛋白样品比较少，鉴于你分组比较多，你可以用12孔做，每个孔铺大约20万个细胞，细胞长至90%做处理

啊，还有做12孔板的话每组只做1个孔的话可以吗？
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为爱而生
10楼2014-05-08 09:39:11
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