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芳草萋萋79

金虫 (初入文坛)

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[求助] western 做不出来已有2人参与

最近我在做western, 其中同一个指标S要做两种样本A,B，A样本在1:800一抗（abcam）后，做了三次，都是单一条带。B样本同样抗体做了七次，都没有条带。可是B样本同一张膜做另一个抗体C就做出来了，条带也单一。内参都可以做出来。S抗体我怕放久了，也重新配置过两次，也都是同一结果。S指标做realtime pcr和 pcr都显示在B样本中有表达。请问这可能什么原因？与蛋白表达产物延迟有关系吗？谢谢！

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1楼 2014-05-24 10:57:56

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314300420

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芳草萋萋79: 金币+45, ★★★很有帮助, 谢谢你的回答 2014-05-26 22:49:14

A和B是否是来自同一种属的样本，如果不是，可能是因为抗体不能识别B样本种属的关系。如果是来自同一种属，只能考虑为样本B中表达含量太低，在WB这个检测水平达不到检测敏感度，表现为阴性结果。

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4楼2014-05-25 23:01:52

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芳草萋萋79

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2楼2014-05-24 23:34:42

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BioChen

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【答案】应助回帖

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芳草萋萋79: 金币+200, ★★★★★最佳答案, 提供了思路，谢谢 2014-05-26 22:48:40

从楼主给的资料看，我找不出任何破绽。要不楼主再多给点信息？楼主实验水平，应该不在我之下。如果怀疑自己的实验结果，换一个人重复下你的实验。说不定，这是一个重大发现。

多年前，我们实验室通过消减杂交（mRNA水平）得到一个癌症特异性的基因，后来的实验一直检测不到这个基因的蛋白。我的师兄怀疑自己的实验做的不好，就不停的重复。现在我们知道它是一个long noncoding RNA, lncRNA（长链非编码RNA）。要是我们当年能不怀疑自己的实验水平，说不定就能发大文章。

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3楼2014-05-25 07:41:47

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