| 查看: 2757 | 回复: 5 | |||
[求助]
关于原核表达后，WB条带不单一的问题。请大神帮忙！ 已有2人参与
|
最近好不容易表达出蛋白，进入纯化。载体用的pET-32a，有his标签，前几天第一次摇了500ml，尝试挂了ni柱。洗脱下来后跑了电泳。结果如下： 蛋白泳道从左到右依次是：1.M 2.破碎后蛋白上清原液 3.流穿 4.洗脱 5-10分别是20,50,100,200,500mM以及1M咪唑洗脱 maker 从上到下分别是116,66,45,35,25,18,14. 可以看到在50和100mM咪唑浓度时，我的蛋白有被大量洗脱下来。 然后在跑胶的同时，用his抗体做了WB，结果比较奇怪，也希望大家帮我分析一下：   WB我是间隔泳道点样的。M紧挨着是pET-32a空载的上清，然后间隔一个泳道为有我质粒菌的上清。最后一道是第一图的100mM咪唑洗脱。 考染的图只看前六个泳道，第六泳道是第一图的100mM咪唑洗脱跑的。 那么问题来了。his抗体杂出来条带按理说比较单一。为何我的会在目的条带附近出现三个条带呢？是蛋白有降解？还是二硫键错配？ 请大神指导！感激不尽！ |
回复此楼» 猜你喜欢
我面上完蛋了
已经有11人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有3人回复
-
明天应该可查了！？
已经有5人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有7人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有8人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
人气不行了
已经有10人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有24人回复
-
filecode，4个jtjc了
已经有17人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 在做质粒提取，有几个液体不是很清楚！
已经有17人回复
- SDS-PAGE后，考染有条带，WB后检测不到目的蛋白。
已经有7人回复
- western 做不出来
已经有7人回复
- 各位大神，求助：PCR产物纯化后没有条带了……
已经有34人回复
- 双酶切后，质粒条带弥散
已经有13人回复
- 请问谁做western blot有关VEGFR2蛋白表达定量的？
已经有12人回复
- 毕赤酵母表达时的杂蛋白问题
已经有16人回复
- Western blot目的条带显影后怎么会这样？？？看图片
已经有8人回复
- 细菌基因组中为什么会有多个16srDNA片段？
已经有11人回复
- WB检测蛋白表达量时关于上样量的问题？
已经有16人回复
- WB结果膜总是黑成一片是怎么回事
已经有17人回复
- WB结果杂不出目的条带，只有特别亮的非特异性条带，求高手解释原因
已经有10人回复
- 提取的蛋白做SDS-PAEG时上样量可以不同吗？
已经有10人回复
- WB条带总是不太整齐
已经有6人回复
- 急急急！PI3K信号通路
已经有14人回复
- 请大家帮忙看看我的蛋白电泳图，谢谢大家了
已经有10人回复
- RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
已经有14人回复
- mRNA水平和蛋白水平不一致如何解释
已经有20人回复
- 请问哪位高手用琼脂糖电泳跑过蛋白？
已经有10人回复
- 【求助/交流】蛋白电泳条带总是跑不下去，何因？
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决
已经有8人回复
- 【求助/交流】求助：蛋白质样品浓度比较小，电泳上样量多少合适呀？
已经有14人回复
2楼2015-04-24 09:07:00
lirol
金虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1416.1
- 散金: 25
- 红花: 4
- 帖子: 188
- 在线: 229.2小时
- 虫号: 2056003
- 注册: 2012-10-12
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2015-04-24 16:56:16
4楼2015-04-25 10:33:39
zhixuec
木虫 (著名写手)
- 应助: 24 (小学生)
- 金币: 3328.2
- 散金: 601
- 红花: 6
- 帖子: 2564
- 在线: 191.4小时
- 虫号: 957824
- 注册: 2010-02-28
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
5楼2015-04-27 17:37:01
6楼2015-04-27 18:46:12
20