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请教包涵体蛋白柱上复性的具体操作步骤，毕业急用，多多帮忙 已有2人参与
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| 我的蛋白时包涵体蛋白，想通过复性把其转变为可溶性的蛋白 ，看了很多文献，说柱上复性比较好，透析方法试了三种结果均非常的不理想，关乎毕业事宜，还请做过得 或者知道的各位多多帮忙啊，感激不尽 |
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Inclusion bodies were separated from the cytosolic protein pool by centrifugation at 20,000 g for 30 min, and the inclusion bodies-containing pellet was solubilized with 4 ml of solubilization buffer (6 M Urea, 200 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.3), supplemented with 10 μM β-mercaptoethanol and incubated overnight at 4°C under constant rotation. Thereafter, the sample was spun at 25,000 g for 30 min to remove any insoluble material and the His-tagged protein was purified using HisPurTM Ni-NTA Resin Hope it works with you. Good luck! |
2楼2015-04-08 19:37:55
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张冰宝(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2015-04-09 08:24:22
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包涵体洗涤 1）各取超裂液 1485μL加入 1.5mL 离心管中，加 20%DOC 储存液至终浓度为 0.2%。加 1mol/L 的 DTT 储存液至终浓度 0.6mmol/L，充分混匀。4℃静置 10min 以上。 2）12000 r/min 离心 5min。 3）加入 PBS 1350μL、20%DOC 储存液至终浓度为 2%，充分重悬沉淀。室温静置 10min 以上。 4）12000 r/min 离心 5min，弃上清。 5）加入 PBS1350μL、20%DOC 储存液至终浓度为 2%，充分重悬沉淀。室温静置 10min 以上。 6）12000 r/min 离心 5min，弃上清。 取离心沉淀用预冷的 PBS 重悬，SDS-PAGE 分析包涵体洗涤情况 |
3楼2015-04-08 22:41:27
4楼2015-04-09 09:10:20
5楼2015-04-09 09:10:41
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thank you for your attention Some details need to be confirmed： 1,Urea is a denaturant, whether the protein is denatured after dissolution 2,The need for agitation when constant rotated？ 3,the sample was spun at 25,000 g for 30 min to remove any insoluble material ,so The supernatant is the soluble protein，right？ |
6楼2015-04-09 09:26:38
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7楼2015-04-09 14:09:31
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