| 查看: 2062 | 回复: 8 | |||
[求助]
请教包涵体蛋白柱上复性的具体操作步骤，毕业急用，多多帮忙 已有2人参与
|
| 我的蛋白时包涵体蛋白，想通过复性把其转变为可溶性的蛋白 ，看了很多文献，说柱上复性比较好，透析方法试了三种结果均非常的不理想，关乎毕业事宜，还请做过得 或者知道的各位多多帮忙啊，感激不尽 |
回复此楼» 猜你喜欢
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白原核表达和包涵体纯化问题
已经有8人回复
- 包涵体上镍离子柱纯化后，洗脱收集的液体中目的蛋白不见了
已经有10人回复
- GST包涵体蛋白复性后挂不上柱子，急急急~~
已经有7人回复
- 包涵体用TGE缓冲液透析复性需要加尿素吗
已经有10人回复
- 目的蛋白表达纯化，求教高手
已经有12人回复
- 包涵体的变复性
已经有4人回复
- 包涵体复性试剂盒
已经有7人回复
- 包涵体有活性吗？
已经有10人回复
- 关于重组蛋白包涵体的溶解及复性
已经有5人回复
- pET28a载体蛋白表达为包涵体
已经有5人回复
- 包涵体蛋白纯化不溶解，怎麽办？
已经有20人回复
- 如何解决包涵体复性沉淀问题？
已经有16人回复
- 重组蛋白是包涵体怎么溶
已经有42人回复
- 透析 蛋白沉淀 复性
已经有22人回复
- 原核表达形成了包涵体怎么办啊？
已经有22人回复
- 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
已经有17人回复
- 包涵体变性复性
已经有11人回复
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-09 08:24:17
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-09 08:24:17
|
Inclusion bodies were separated from the cytosolic protein pool by centrifugation at 20,000 g for 30 min, and the inclusion bodies-containing pellet was solubilized with 4 ml of solubilization buffer (6 M Urea, 200 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.3), supplemented with 10 μM β-mercaptoethanol and incubated overnight at 4°C under constant rotation. Thereafter, the sample was spun at 25,000 g for 30 min to remove any insoluble material and the His-tagged protein was purified using HisPurTM Ni-NTA Resin Hope it works with you. Good luck! |
2楼2015-04-08 19:37:55
15871472357
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 890.1
- 散金: 177
- 帖子: 113
- 在线: 95小时
- 虫号: 3663267
- 注册: 2015-01-25
- 专业: 兽医寄生虫学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2015-04-09 08:24:22
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2015-04-09 08:24:22
|
包涵体洗涤 1）各取超裂液 1485μL加入 1.5mL 离心管中，加 20%DOC 储存液至终浓度为 0.2%。加 1mol/L 的 DTT 储存液至终浓度 0.6mmol/L，充分混匀。4℃静置 10min 以上。 2）12000 r/min 离心 5min。 3）加入 PBS 1350μL、20%DOC 储存液至终浓度为 2%，充分重悬沉淀。室温静置 10min 以上。 4）12000 r/min 离心 5min，弃上清。 5）加入 PBS1350μL、20%DOC 储存液至终浓度为 2%，充分重悬沉淀。室温静置 10min 以上。 6）12000 r/min 离心 5min，弃上清。 取离心沉淀用预冷的 PBS 重悬，SDS-PAGE 分析包涵体洗涤情况 |
3楼2015-04-08 22:41:27
4楼2015-04-09 09:10:20
5楼2015-04-09 09:10:41
|
thank you for your attention Some details need to be confirmed： 1,Urea is a denaturant, whether the protein is denatured after dissolution 2,The need for agitation when constant rotated？ 3,the sample was spun at 25,000 g for 30 min to remove any insoluble material ,so The supernatant is the soluble protein，right？ |
6楼2015-04-09 09:26:38
15871472357
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 890.1
- 散金: 177
- 帖子: 113
- 在线: 95小时
- 虫号: 3663267
- 注册: 2015-01-25
- 专业: 兽医寄生虫学
7楼2015-04-09 14:09:31
8楼2015-04-10 13:58:05
9楼2015-04-10 15:18:37
50