应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 请教包涵体蛋白柱上复性的具体操作步骤，毕业急用，多多帮忙
51/1返回列表
查看: 1838  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 请教包涵体蛋白柱上复性的具体操作步骤，毕业急用，多多帮忙 已有2人参与

我的蛋白时包涵体蛋白，想通过复性把其转变为可溶性的蛋白 ，看了很多文献，说柱上复性比较好，透析方法试了三种结果均非常的不理想，关乎毕业事宜，还请做过得 或者知道的各位多多帮忙啊，感激不尽
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-08 16:26:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15871472357

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 张冰宝 at 2015-04-09 09:10:20
非常感谢你的帮助，我想问一下这样洗涤包涵体得到的就是比较纯的包涵体吗？doc与dtt的作用示什么呢？我一般都是离心菌液获得包涵体，然后进行超声破碎然后进行纯化。那你这样洗涤完以后得到的是包涵体还是可溶性蛋 ...

超声波破碎后离心得到包涵体，取沉淀然后在用上法，doc和dtt的作用我也不清楚，这样就可以达到可溶性蛋白。可以通过SDS-PAGE来验证，作个对比，有条带就表示有可溶性蛋白
赞一下 回复此楼
7楼2015-04-09 14:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-04-09 08:24:17
Inclusion bodies were separated from the cytosolic protein pool by centrifugation at 20,000 g for 30 min, and the inclusion bodies-containing pellet was solubilized with 4 ml of solubilization buffer (6 M Urea, 200 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.3), supplemented with 10 μM β-mercaptoethanol and incubated overnight at 4°C under constant rotation. Thereafter, the sample was spun at 25,000 g for 30 min to remove any insoluble material and the His-tagged protein was purified using HisPurTM Ni-NTA Resin

Hope it works with you. Good luck!
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-04-08 19:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15871472357

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2015-04-09 08:24:22
包涵体洗涤
1）各取超裂液 1485μL加入 1.5mL 离心管中，加 20%DOC 储存液至终浓度为 0.2%。加 1mol/L 的 DTT 储存液至终浓度 0.6mmol/L，充分混匀。4℃静置 10min 以上。
2）12000 r/min 离心 5min。
3）加入 PBS 1350μL、20%DOC 储存液至终浓度为 2%，充分重悬沉淀。室温静置 10min 以上。
4）12000 r/min 离心 5min，弃上清。
5）加入 PBS1350μL、20%DOC 储存液至终浓度为 2%，充分重悬沉淀。室温静置 10min 以上。
6）12000 r/min 离心 5min，弃上清。
取离心沉淀用预冷的 PBS 重悬，SDS-PAGE 分析包涵体洗涤情况
赞一下 回复此楼
3楼2015-04-08 22:41:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 15871472357 at 2015-04-08 22:41:27
包涵体洗涤
1）各取超裂液 1485μL加入 1.5mL 离心管中，加 20%DOC 储存液至终浓度为 0.2%。加 1mol/L 的 DTT 储存液至终浓度 0.6mmol/L，充分混匀。4℃静置 10min 以上。
2）12000 r/min 离心 5min。
3）加入 P ...

非常感谢你的帮助，我想问一下这样洗涤包涵体得到的就是比较纯的包涵体吗？doc与dtt的作用示什么呢？我一般都是离心菌液获得包涵体，然后进行超声破碎然后进行纯化。那你这样洗涤完以后得到的是包涵体还是可溶性蛋白？
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-09 09:10:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +16 RichLi_ 2026-03-25 16/800 2026-03-26 16:18 by bruceku07
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +6 小小陈小小 2026-03-22 9/450 2026-03-26 15:58 by dick_runner
[考研] 材料277求调剂 +5 min3 2026-03-24 5/250 2026-03-26 15:13 by zzll406
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 289求调剂 +9 怀瑾握瑜l 2026-03-20 9/450 2026-03-25 11:02 by userper
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭