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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请教各位关于动物组织RNA提取的的问题，一直提不出来，请各位给点建议。
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小马fight

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位关于动物组织RNA提取的的问题，一直提不出来，请各位给点建议。 已有9人参与

就从头开始说吧，研一的学生，年前开始做这个方面，但一直跑不出条带，用尿囊液可以提取出来，用的是罗氏病毒RNA提取试剂盒，用的剪刀、镊子、研钵、研磨器高压灭菌，送来的病料一般是冷冻的，解冻之后在冰上研磨，加的是PBS（上一次加了用DEPC处理的水，但也没出条带），研磨之后13000r离心15分钟，取200微升上清用试剂盒提取总RNA，大体步骤是这样，问一下各位常做这个的这些步骤里面哪些会有RNA酶污染，老师给提供了固相RNA酶清除剂，但还没有使用，请各位提供点经验吧，谢谢了。
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1楼 2015-04-07 16:32:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小马fight

新虫 (初入文坛)
来大神解答一下吧
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2楼2015-04-10 15:31:34
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527219179

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

研钵灭菌后，用之前可以用酒精烧烧，样品不需解冻，解冻之后RNA迅速降解，冰上研磨要迅速，推荐液氮研磨，研磨之后迅速转管，转管之后直接加裂解液，按照试剂盒步骤提取即可。不知道你为什么要先加水研磨离心再取上清？研磨之后大部分RNA还在细胞中，只有少量释放，所以需要加裂解液裂解细胞释放RNA。个人看法，最后你提的到底病毒还是动植物？
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4楼2015-05-04 12:31:57
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普通回帖

liyibo373

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得冰上研磨的时候，应该加trizol研磨吧。我不是太懂，仅供参考
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互相交流，互相学习，共同进步
3楼2015-04-20 13:39:13
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wr1992

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你现在提的怎么样了?是动物组织吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2015-05-15 00:03:01
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

冰上研磨不靠谱，用液氮研磨，温度不够，研磨不彻底，会使研磨时间增加，RNA降解加快
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科研炮灰
6楼2015-05-15 08:37:09
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p930910

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 527219179 at 2015-05-04 12:31:57
研钵灭菌后，用之前可以用酒精烧烧，样品不需解冻，解冻之后RNA迅速降解，冰上研磨要迅速，推荐液氮研磨，研磨之后迅速转管，转管之后直接加裂解液，按照试剂盒步骤提取即可。不知道你为什么要先加水研磨离心再取上 ...

请问你是如何把研磨后的组织粉末转移的？是用药匙刮到EP管中再加裂解液的吗？
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7楼2015-12-26 10:18:44
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shanxw

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

组织RNA提取  液氮研磨法
研钵高压灭菌   液氮预冷    放入组织加液氮研磨  组织成粉末状加入Ttizol    加入液氮继续研磨  使用灭菌的刮勺将样品转移到EP管
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8楼2015-12-26 20:06:57
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Rational-zxs

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

个人专业提取RNA100年。我以前提取很多次的RNA，效果不好。实验方面的主要是有液氮；材料最主要的是选择新鲜嫩叶，很容易提出来。百试百灵！
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真诚
9楼2015-12-27 20:25:12
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chaperonesy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by Rational-zxs at 2015-12-27 20:25:12
个人专业提取RNA100年。我以前提取很多次的RNA，效果不好。实验方面的主要是有液氮；材料最主要的是选择新鲜嫩叶，很容易提出来。百试百灵！

我也最近从植物组织里提RNA,每次提取前所有的枪头，EP管，研钵，用到的所有物品都用DEPC水温育过夜，然后高温灭菌，材料也是新鲜的组织，但提取效果不好，每次5s基本没带，28s也降解的厉害，求大神支招

发自小木虫Android客户端
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10楼2015-12-27 22:33:25
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