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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 人肺组织中提取的总RNA的浓度差异很大?
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teluoyi815

银虫 (初入文坛)

[求助] 人肺组织中提取的总RNA的浓度差异很大?已有2人参与

采用QIAGEN试剂盒提取人肺石蜡切片组织的总RNA，对于组织切片大小差不多的样品，为什么测出来的总RNA浓度相差很大，高的可以达到300-500 ng/uL，低的却只有20-50 ng/uL，甚至还有几纳克的，请问这样的结果正常吗？
对于一般的肺组织样品，其总RNA浓度一般是多少呢？请有经验的虫友指点一下，谢谢。
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1楼2014-11-11 16:36:28
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wangranjun

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★ ★ ★
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teluoyi815: 金币+1, ★有帮助 2014-11-11 16:55:37
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-11 22:05:33
若是组织大小差不多的话这样的情况很异常哎！可以想一下是不是操作过程中出现的失误，例如所有的东西是否都经过灭菌，操作过程中尽量轻柔等……提取出RNA的量不太好说，和你组织的量有关系的！
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2014-11-11 16:45:47
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teluoyi815

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangranjun at 2014-11-11 16:45:47
若是组织大小差不多的话这样的情况很异常哎！可以想一下是不是操作过程中出现的失误，例如所有的东西是否都经过灭菌，操作过程中尽量轻柔等……提取出RNA的量不太好说，和你组织的量有关系的！

操作的时候是一致的。 是不是几百纳克的浓度不正常？测的时候RNA已经降解，或者DNA干扰呢？
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3楼2014-11-11 16:55:11
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wangranjun

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引用回帖:
3楼: Originally posted by teluoyi815 at 2014-11-11 16:55:11
操作的时候是一致的。 是不是几百纳克的浓度不正常？测的时候RNA已经降解，或者DNA干扰呢？...

嗯，我猜是的，降解的可能性比较大的
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
4楼2014-11-11 17:11:23
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teluoyi815

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangranjun at 2014-11-11 17:11:23
嗯，我猜是的，降解的可能性比较大的...

RNA降解确定是会导致所测定的浓度升高吗，原理是什么呢？因为我对分子了解较少，所以有些基本问题不懂。
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5楼2014-11-11 17:24:26
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wangranjun

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★ ★ ★
teluoyi815: 金币+2 2014-11-11 17:51:09
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-11-17 10:38:35
引用回帖:
5楼: Originally posted by teluoyi815 at 2014-11-11 17:24:26
RNA降解确定是会导致所测定的浓度升高吗，原理是什么呢？因为我对分子了解较少，所以有些基本问题不懂。...

降解会使浓度降低……一般情况下300-500 ng/uL差不多的，以后测浓度可以看一下260/280
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
6楼2014-11-11 17:33:40
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teluoyi815

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wangranjun at 2014-11-11 17:33:40
降解会使浓度降低……一般情况下300-500 ng/uL差不多的，以后测浓度可以看一下260/280...

哦，谢谢耐心回复。
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7楼2014-11-11 17:51:01
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yvanzeng

金虫 (小有名气)

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★ ★
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teluoyi815: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-11-12 09:20:03
我也是用Ambion的试剂盒提取石蜡切片的，一般有100ng/uL，低的也像你这种情况。提取石蜡最关键的是脱蜡要彻底以及蛋白酶消化要完全，可以适当延长这两步骤的时间。毕竟按protocol的方法来做我觉得有所差异。
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8楼2014-11-11 23:56:34
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teluoyi815

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yvanzeng at 2014-11-11 23:56:34
我也是用Ambion的试剂盒提取石蜡切片的，一般有100ng/uL，低的也像你这种情况。提取石蜡最关键的是脱蜡要彻底以及蛋白酶消化要完全，可以适当延长这两步骤的时间。毕竟按protocol的方法来做我觉得有所差异。

那你有没有那种达到三四百纳克的高浓度呢？我就担心我的高浓度是假阳性的感觉。另外你是用的组织切片是多少mg的，或者多大尺寸的？
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9楼2014-11-12 09:19:47
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teluoyi815

银虫 (初入文坛)
请问还有虫友知道吗？
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10楼2014-11-17 09:06:49
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