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dzdingo

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取RNA前组织样品的保存 已有2人参与

我需要从卵里面提取总RNA,因为卵的数量比较多,一次用不完,要放入-80的冰箱里保存。在网上查保存方法,有些说在放入-80冰箱前要先放在液氮中处理半个小时,有些说可以直接放入-80冰箱。我的理解是:保存前的处理都是要降低RNA酶的活性,既然-80可以长期保存组织,那么液氮处理也不是必需的吧。

问题如下:1、关于RNA酶活性。-80和液氮两种条件下RNA酶活性的区别大吗?
                 2、如果需要在液氮中处理,怎么处理,是放在ep管理然后直接投入液氮中吗?ep管用之前需要进行DEPC处理吗?在液氮中放的时间久了ep管不会出问题吧?处理完取出后直接就把ep管放入-80冰箱?
                 3、液氮处理的时间,多久合适?是固定的吗,还是根据组织来定,需要自己进行摸索?

由于我是第一次做,而且以前没什么分子生物学的基础,希望各位懂得的大哥大姐能给指点一下,小弟在此感激不尽。
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2014-06-08 02:51:02
1. 液氮速冻,比直接放-80绝对要快得多,效果也更好。

2. 用保温盒装液氮,内放浮板,ep管(进口/国产DEPC处理,盖子用镊子穿洞防爆破)装液氮后放在浮板上,在往ep管放样品,取出后在液氮快挥发完盖上盖子,投入液氮暂存,全部样品处理完后一起转移至-80。ep管的盖子打洞后,液氮中放多久都行。

3. 按2操作即可,液氮直接升华而速冻,几秒钟的事情。
2楼2014-06-07 21:42:33
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励交流经验! 2014-06-08 02:51:56
液氮冷春保存的好些,快速冷冻,结果也好,其实放-80也没啥问题,但是我们都是先液氮后-80 ,我测算过,液氮的话,大约30秒就可以彻底冷冻,而-80至少5分钟以上,一般都20多分钟(我是组织),这么长的时差,影响肯定存在

用ep管放置,一般的话,要处理下,或者直接买无RNA酶的管子,然后放液氮的时候,你先把管子放在泡沫盒里,然后往里面倒液氮。这样放置放在液氮罐里炸裂。

放进去一两分钟然后捞出来就可以了,处理时间没太多影响
天行健
3楼2014-06-07 23:38:39
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所谓医人z

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2014-06-08 02:52:14
我做过组织冻存,直接放在-80℃里面,感觉没什么影响。液氮没用过,刚好学习一下 (  ̄▽ ̄)"
4楼2014-06-08 00:21:24
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dzdingo

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-06-07 21:42:33
1. 液氮速冻,比直接放-80绝对要快得多,效果也更好。

2. 用保温盒装液氮,内放浮板,ep管(进口/国产DEPC处理,盖子用镊子穿洞防爆破)装液氮后放在浮板上,在往ep管放样品,取出后在液氮快挥发完盖上盖子,投入 ...

抱歉啊,刚考完那该死的中特,好久没来过了。我要做的是昆虫的卵,非常小,如果按你说的这种方法,把卵放入ep管后会不会出现飞溅的情况啊。
5楼2014-06-12 10:57:27
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by dzdingo at 2014-06-12 10:57:27
抱歉啊,刚考完那该死的中特,好久没来过了。我要做的是昆虫的卵,非常小,如果按你说的这种方法,把卵放入ep管后会不会出现飞溅的情况啊。...

不会,它们难道比水稻花粉更小?
6楼2014-06-12 23:31:24
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liulingjun15

金虫 (小有名气)

觉得用液氮速冻好吓人,之前做感受态,从液氮罐拿出来后就爆炸了,太吓人了,差点伤到,都有心理阴影了。慎重啊!
7楼2015-07-16 17:55:45
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