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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 提取RNA前组织样品的保存
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dzdingo

铜虫 (小有名气)

[求助] 提取RNA前组织样品的保存 已有2人参与

我需要从卵里面提取总RNA，因为卵的数量比较多，一次用不完，要放入-80的冰箱里保存。在网上查保存方法，有些说在放入-80冰箱前要先放在液氮中处理半个小时，有些说可以直接放入-80冰箱。我的理解是:保存前的处理都是要降低RNA酶的活性，既然-80可以长期保存组织，那么液氮处理也不是必需的吧。

问题如下：1、关于RNA酶活性。-80和液氮两种条件下RNA酶活性的区别大吗？
                 2、如果需要在液氮中处理，怎么处理，是放在ep管理然后直接投入液氮中吗？ep管用之前需要进行DEPC处理吗？在液氮中放的时间久了ep管不会出问题吧？处理完取出后直接就把ep管放入-80冰箱？
                 3、液氮处理的时间，多久合适？是固定的吗，还是根据组织来定，需要自己进行摸索？

由于我是第一次做，而且以前没什么分子生物学的基础，希望各位懂得的大哥大姐能给指点一下，小弟在此感激不尽。
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1楼 2014-06-07 15:46:11
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励交流经验！ 2014-06-08 02:51:56
液氮冷春保存的好些，快速冷冻，结果也好，其实放-80也没啥问题，但是我们都是先液氮后-80 ，我测算过，液氮的话，大约30秒就可以彻底冷冻，而-80至少5分钟以上，一般都20多分钟（我是组织），这么长的时差，影响肯定存在

用ep管放置，一般的话，要处理下，或者直接买无RNA酶的管子，然后放液氮的时候，你先把管子放在泡沫盒里，然后往里面倒液氮。这样放置放在液氮罐里炸裂。

放进去一两分钟然后捞出来就可以了，处理时间没太多影响
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天行健
3楼2014-06-07 23:38:39
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查看全部 7 个回答

Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-06-08 02:51:02
1. 液氮速冻，比直接放-80绝对要快得多，效果也更好。

2. 用保温盒装液氮，内放浮板，ep管（进口/国产DEPC处理，盖子用镊子穿洞防爆破）装液氮后放在浮板上，在往ep管放样品，取出后在液氮快挥发完盖上盖子，投入液氮暂存，全部样品处理完后一起转移至-80。ep管的盖子打洞后，液氮中放多久都行。

3. 按2操作即可，液氮直接升华而速冻，几秒钟的事情。
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2楼2014-06-07 21:42:33
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所谓医人z

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-06-08 02:52:14
我做过组织冻存，直接放在-80℃里面，感觉没什么影响。液氮没用过，刚好学习一下 ( ￣▽￣)"
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4楼2014-06-08 00:21:24
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dzdingo

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Lau_Kimura at 2014-06-07 21:42:33
1. 液氮速冻，比直接放-80绝对要快得多，效果也更好。

2. 用保温盒装液氮，内放浮板，ep管（进口/国产DEPC处理，盖子用镊子穿洞防爆破）装液氮后放在浮板上，在往ep管放样品，取出后在液氮快挥发完盖上盖子，投入 ...

抱歉啊，刚考完那该死的中特，好久没来过了。我要做的是昆虫的卵，非常小，如果按你说的这种方法，把卵放入ep管后会不会出现飞溅的情况啊。
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5楼2014-06-12 10:57:27
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