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xiashiyu1986

新虫 (小有名气)

[求助] 动物组织中RNA的提取 已有9人参与

动物组织苗检测:疫苗来源是鸡胚和脾脏,剪碎、冻干后用PBS溶解,6000r/min离心5min,上清用试剂盒提取RNA,扩增后无条带。引物没问题,想请教组织中RNA应如何提取?手提时RNA有白色沉淀,这白色沉淀是什么?
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grase

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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:44:05
白色沉淀是蛋白。
如果上清,RNA量非常少,检测不出正常。
如果是提取组织,应该是液氮研磨后加裂解液才可以。
2楼2014-06-18 10:10:09
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖


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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:44:11
蛋白质。
建议你加一步蛋白质纯化就哦了,或者溶解RNA后,离心取上清即得。
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
3楼2014-06-18 10:26:12
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

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这样都不降解RNA那太没天理了
4楼2014-06-18 16:49:02
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xv1215

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:44:19
全降解了,组织提取rna实验条件跟苛刻,必须严格要求,液氮研磨是必须的,此外用的手术器械,研铂等都需要180度高温去除RNA酶的,另外提完要测OD值电泳测质量,建议提完马上反转,否则负80保存

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-06-18 17:12:02
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jjheng

新虫 (初入文坛)

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xiashiyu1986(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 13:09:19
提取RNA一定要注意降解的问题,建议去找一份详细的方法
6楼2014-06-19 11:33:36
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Dr.sun

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:44:29
我们组织一般用液氮研磨提取,那样效果比较好,可能会有一定的降解但基本能保证实验进行
肿瘤研究与CAR-T细胞治疗
7楼2014-06-19 16:42:14
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394929934

铜虫 (正式写手)

为什么要剪碎 冻干。。。。
动物营养交流群181980105
8楼2014-06-20 19:32:55
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xiashiyu1986

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 394929934 at 2014-06-20 19:32:55
为什么要剪碎 冻干。。。。

因为是生产动物疫苗,做成冻干成品苗,现在检验成品苗所以要用PBS溶解。
9楼2014-06-25 10:52:46
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hh54ll

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xiashiyu1986(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 13:09:32
第一,首先保证所有的设备都经过去RNA酶处理
第二,粉粹组织的时的温度要严格控制,一般是液氮中经行。
组织RNA相对而言还是很好提取的,提取量也比较多。你如果做到了以上两点,那么应该没问题
10楼2014-07-07 11:38:53
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