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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 动物组织中RNA的提取
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xiashiyu1986

新虫 (小有名气)

[求助] 动物组织中RNA的提取 已有9人参与

动物组织苗检测：疫苗来源是鸡胚和脾脏，剪碎、冻干后用PBS溶解，6000r/min离心5min，上清用试剂盒提取RNA，扩增后无条带。引物没问题，想请教组织中RNA应如何提取？手提时RNA有白色沉淀，这白色沉淀是什么?
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1楼 2014-06-18 09:56:06
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grase

捐助贵宾 (职业作家)

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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:44:05
白色沉淀是蛋白。
如果上清，RNA量非常少，检测不出正常。
如果是提取组织，应该是液氮研磨后加裂解液才可以。
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2楼2014-06-18 10:10:09
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

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★
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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:44:11
蛋白质。
建议你加一步蛋白质纯化就哦了，或者溶解RNA后，离心取上清即得。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2014-06-18 10:26:12
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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这样都不降解RNA那太没天理了
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4楼2014-06-18 16:49:02
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xv1215

金虫 (正式写手)

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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:44:19
全降解了，组织提取rna实验条件跟苛刻，必须严格要求，液氮研磨是必须的，此外用的手术器械，研铂等都需要180度高温去除RNA酶的，另外提完要测OD值电泳测质量，建议提完马上反转，否则负80保存

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-06-18 17:12:02
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jjheng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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xiashiyu1986(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 13:09:19
提取RNA一定要注意降解的问题，建议去找一份详细的方法
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6楼2014-06-19 11:33:36
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Dr.sun

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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xiashiyu1986(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-20 10:44:29
我们组织一般用液氮研磨提取，那样效果比较好，可能会有一定的降解但基本能保证实验进行
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肿瘤研究与CAR-T细胞治疗
7楼2014-06-19 16:42:14
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394929934

铜虫 (正式写手)
为什么要剪碎 冻干。。。。
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动物营养交流群181980105
8楼2014-06-20 19:32:55
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xiashiyu1986

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 394929934 at 2014-06-20 19:32:55
为什么要剪碎 冻干。。。。

因为是生产动物疫苗，做成冻干成品苗，现在检验成品苗所以要用PBS溶解。
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9楼2014-06-25 10:52:46
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hh54ll

新虫 (小有名气)

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★ ★ ★
xiashiyu1986(gyesang代发): 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 13:09:32
第一，首先保证所有的设备都经过去RNA酶处理
第二，粉粹组织的时的温度要严格控制，一般是液氮中经行。
组织RNA相对而言还是很好提取的，提取量也比较多。你如果做到了以上两点，那么应该没问题
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10楼2014-07-07 11:38:53
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