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小马fight

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位关于动物组织RNA提取的的问题,一直提不出来,请各位给点建议。 已有9人参与

就从头开始说吧,研一的学生,年前开始做这个方面,但一直跑不出条带,用尿囊液可以提取出来,用的是罗氏病毒RNA提取试剂盒,用的剪刀、镊子、研钵、研磨器高压灭菌,送来的病料一般是冷冻的,解冻之后在冰上研磨,加的是PBS(上一次加了用DEPC处理的水,但也没出条带),研磨之后13000r离心15分钟,取200微升上清用试剂盒提取总RNA,大体步骤是这样,问一下各位常做这个的这些步骤里面哪些会有RNA酶污染,老师给提供了固相RNA酶清除剂,但还没有使用,请各位提供点经验吧,谢谢了。
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shanxw

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

组织RNA提取  液氮研磨法
研钵高压灭菌   液氮预冷    放入组织加液氮研磨  组织成粉末状加入Ttizol    加入液氮继续研磨  使用灭菌的刮勺将样品转移到EP管
8楼2015-12-26 20:06:57
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小马fight

新虫 (初入文坛)

来大神解答一下吧
2楼2015-04-10 15:31:34
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liyibo373

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得冰上研磨的时候,应该加trizol研磨吧。我不是太懂,仅供参考
互相交流,互相学习,共同进步
3楼2015-04-20 13:39:13
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527219179

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

研钵灭菌后,用之前可以用酒精烧烧,样品不需解冻,解冻之后RNA迅速降解,冰上研磨要迅速,推荐液氮研磨,研磨之后迅速转管,转管之后直接加裂解液,按照试剂盒步骤提取即可。不知道你为什么要先加水研磨离心再取上清?研磨之后大部分RNA还在细胞中,只有少量释放,所以需要加裂解液裂解细胞释放RNA。个人看法,最后你提的到底病毒还是动植物?
4楼2015-05-04 12:31:57
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