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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA提取，常温离心机离心1小时，还能提出来么？
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后悔无期

金虫 (小有名气)

[求助] RNA提取，常温离心机离心1小时，还能提出来么？

RNA提取，要求离心机13000r/min离心1小时，因为没有4度离心机，只能用常温离心，这样还能提出来么？对离心机来说，这么长工作时间，对以后的使用是否有影响？
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
1楼 2012-10-24 09:33:52
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
后悔无期: 回帖置顶 2012-10-24 11:53:26
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-10-24 13:53:02
后悔无期: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-10-24 20:49:33
1、我们的冷冻离心机自从坏掉以后，提取动物、植物、细菌、真菌的RNA都是用常温的。
2、上述提取中，从来没有哪一步需要1h的离心哦。
3、温度过高会影响RNA的产率和纯度，有时候掺杂蛋白，看下游实验的需求。
4、 楼主最后一句话是指对离心机不好还是对样品不好？对离心机没事，样品会受影响。
5、实在不好借用其他实验室的情况下，摸索一把，把离心时间改为15min即可。
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4楼2012-10-24 11:05:15
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Rowling茹

银虫 (小有名气)
后悔无期: 回帖置顶 2012-10-25 18:00:33
我最近一直在提取植物ＲＮＡ，我们实验室用的ＲＮＡ试剂盒，离心的转速时１００００ｒｐｍ和１２０００ｒｐｍ，时间没有超过两分钟的。前两天我们实验室成文坏掉了，改用冷冻，跑电泳结果表明：常温和冷冻离心机对ＲＮＡ提取没有影响。
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16楼2012-10-25 17:38:41
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aloon111

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计很难，离心机工作1 个小时，机器会发热。
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汇天下之贤
2楼2012-10-24 09:48:07
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pys5003

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-24 13:53:12
离心机一般是用来分离，比重有差别的混合体是的不同物质或成分，如果要求是4度，而你用常温，这可能有些成分温度高了就溶解了，而其比重的差别也消失了。从而无法分离出目标物质。
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3楼2012-10-24 10:02:14
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生物大虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
肯定降解的严重，离心1h是什么概念，一般都10~15min的，RNA降解主要是Rnase的作用，这东西无处不在且相当顽强
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谋事在人成事在天
10楼2012-10-24 15:50:01
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
离心一个小时太夸张了……适当把时间调短一点吧……而且要看你离心的时候RNA是什么状态，如果是醇沉或者酚抽的话，由于体系中RNase少倒还好，要是前面的几步蛋白和RNA还没有分离的步骤的话用常温离心挺悬的~
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11楼2012-10-24 16:07:47
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后悔无期

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aloon111 at 2012-10-24 09:48:07
估计很难，离心机工作1 个小时，机器会发热。

是啊，在离心之前，就考虑了机器会发热的问题！RNA估计都被降解了。
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5楼2012-10-24 11:42:35
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后悔无期

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pys5003 at 2012-10-24 10:02:14
离心机一般是用来分离，比重有差别的混合体是的不同物质或成分，如果要求是4度，而你用常温，这可能有些成分温度高了就溶解了，而其比重的差别也消失了。从而无法分离出目标物质。

离心机长时间工作-----发热，对目标物质的影响很大，RNA可能被降解了。我们考虑的主要还是温度的影响。
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
6楼2012-10-24 11:45:30
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后悔无期

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhwenxing at 2012-10-24 11:05:15
1、我们的冷冻离心机自从坏掉以后，提取动物、植物、细菌、真菌的RNA都是用常温的。
2、上述提取中，从来没有哪一步需要1h的离心哦。
3、温度过高会影响RNA的产率和纯度，有时候掺杂蛋白，看下游实验的需求。
4、 ...

嗯，谢谢你！
1、我们提的是一种树的RNA，用了很多方法，都还没提出来。
2、由于是两个人做一个实验，partner搜到的方法，就用来试试了！
3、逆转录，之后是用来克隆基因。
4、我指的是离心机，如果这次能提出来，那以后可能还会用同样的方法，由于我们提的样品要十几个，每次读这样搞，担心离心机会坏掉。
5、正在想办法ing。。。
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别回忆，因为回不去。把眼泪留给最疼你的人，把微笑留给伤你最深的人。
7楼2012-10-24 11:52:44
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
引用回帖:
5楼: Originally posted by 后悔无期 at 2012-10-24 11:42:35
是啊，在离心之前，就考虑了机器会发热的问题！RNA估计都被降解了。...

发热不是RNA降解的因素！
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8楼2012-10-24 13:30:30
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-24 13:53:25
引用回帖:
7楼: Originally posted by 后悔无期 at 2012-10-24 11:52:44
嗯，谢谢你！
1、我们提的是一种树的RNA，用了很多方法，都还没提出来。
2、由于是两个人做一个实验，partner搜到的方法，就用来试试了！
3、逆转录，之后是用来克隆基因。
4、我指的是离心机，如果这次能提出 ...

1、树的？哪种组织？树叶吗？根尖？某个部位？选择合适的提取剂。
2、多看看冷泉港的protocol。
3、离心机没那么娇气，先检查一下转头上的离心管眼里有没有异物，再就是配平好，尽管离心就是了。我们的天天满负荷的用啊用，好几年了，这不嗡嗡的狂转么，O(∩_∩)O哈哈~
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9楼2012-10-24 13:36:27
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