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id90

铜虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母GS115摇瓶发酵 已有2人参与

根据毕赤酵母表达手册,我一般都是YPD活化,之后按1%接种到25ml的BMGY培养基,培养16-18h(OD=4-6),之后离心收集菌体,加入到100ml的BMMY培养基至终OD=1,每天加甲醇诱导。
但是最近看文献有的是 25ml BMGY培养后 用5ml 的BMMY重悬 之后继续培养。哪种方法正确?
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么么哒0120

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by uranuser at 2015-04-02 09:43:22
这应该是同一种方法吧,你在BMGY中培养结束后离心后收集菌体再加入到BMMY中,这一步就是用少量BMMY重悬后,再增大BMMY体积进行诱导培养吧。
简单说就是都正确。事实上,有文献预计BMGY中的甘油耗尽后不离心,直接加 ...

你好,摇瓶发酵如何确定甘油已经消耗完?需不需要饥饿处理一段时间再加甲醇?
7楼2016-09-23 15:35:17
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uranuser

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助! 2015-04-07 11:07:12
这应该是同一种方法吧,你在BMGY中培养结束后离心后收集菌体再加入到BMMY中,这一步就是用少量BMMY重悬后,再增大BMMY体积进行诱导培养吧。
简单说就是都正确。事实上,有文献预计BMGY中的甘油耗尽后不离心,直接加入BMMY进行诱导,我们验证过此种方法表达量没有区别。
2楼2015-04-02 09:43:22
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wsb0306

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
得看你要表达的东西多少,好不好表达,两个方法一样,只不过诱导时一个浓缩了一个稀释了

[ 发自小木虫客户端 ]
虫子
3楼2015-04-02 14:58:06
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id90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wsb0306 at 2015-04-02 14:58:06
得看你要表达的东西多少,好不好表达,两个方法一样,只不过诱导时一个浓缩了一个稀释了

这两种方法诱导时,菌浓度不一样。第一种菌浓OD值约为1、第二种菌浓度大于4.我构建的毕赤酵母是甲醇缓慢利用型。表达蛋白不应该在对数生长期吗?
4楼2015-04-02 15:11:44
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