24小时热门版块排行榜    

查看: 1959  |  回复: 6

id90

铜虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母GS115摇瓶发酵 已有2人参与

根据毕赤酵母表达手册,我一般都是YPD活化,之后按1%接种到25ml的BMGY培养基,培养16-18h(OD=4-6),之后离心收集菌体,加入到100ml的BMMY培养基至终OD=1,每天加甲醇诱导。
但是最近看文献有的是 25ml BMGY培养后 用5ml 的BMMY重悬 之后继续培养。哪种方法正确?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uranuser

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助! 2015-04-07 11:07:12
这应该是同一种方法吧,你在BMGY中培养结束后离心后收集菌体再加入到BMMY中,这一步就是用少量BMMY重悬后,再增大BMMY体积进行诱导培养吧。
简单说就是都正确。事实上,有文献预计BMGY中的甘油耗尽后不离心,直接加入BMMY进行诱导,我们验证过此种方法表达量没有区别。
2楼2015-04-02 09:43:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsb0306

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
得看你要表达的东西多少,好不好表达,两个方法一样,只不过诱导时一个浓缩了一个稀释了

[ 发自小木虫客户端 ]
虫子
3楼2015-04-02 14:58:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

id90

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wsb0306 at 2015-04-02 14:58:06
得看你要表达的东西多少,好不好表达,两个方法一样,只不过诱导时一个浓缩了一个稀释了

这两种方法诱导时,菌浓度不一样。第一种菌浓OD值约为1、第二种菌浓度大于4.我构建的毕赤酵母是甲醇缓慢利用型。表达蛋白不应该在对数生长期吗?
4楼2015-04-02 15:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsb0306

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by id90 at 2015-04-02 15:11:44
这两种方法诱导时,菌浓度不一样。第一种菌浓OD值约为1、第二种菌浓度大于4.我构建的毕赤酵母是甲醇缓慢利用型。表达蛋白不应该在对数生长期吗?...

不一定在指数期诱导,看你的蛋白情况而定

[ 发自小木虫客户端 ]
虫子
5楼2015-04-03 15:47:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)

能不能问下,你活化的菌是平板上的单菌落还是保存的菌种?然后怎么确定在对数生长期呢?我个人觉得第一种方法好,因为我挑过单克隆直接放BMGY,通常要24h才能到OD值4,时间太长就错过对数期了吧。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2015-06-07 15:18:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

么么哒0120

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by uranuser at 2015-04-02 09:43:22
这应该是同一种方法吧,你在BMGY中培养结束后离心后收集菌体再加入到BMMY中,这一步就是用少量BMMY重悬后,再增大BMMY体积进行诱导培养吧。
简单说就是都正确。事实上,有文献预计BMGY中的甘油耗尽后不离心,直接加 ...

你好,摇瓶发酵如何确定甘油已经消耗完?需不需要饥饿处理一段时间再加甲醇?
7楼2016-09-23 15:35:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 id90 的主题更新
信息提示
请填处理意见