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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 毕赤酵母GS115摇瓶发酵
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id90

铜虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母GS115摇瓶发酵 已有2人参与

根据毕赤酵母表达手册，我一般都是YPD活化，之后按1%接种到25ml的BMGY培养基，培养16-18h（OD=4-6），之后离心收集菌体，加入到100ml的BMMY培养基至终OD=1，每天加甲醇诱导。
但是最近看文献有的是 25ml BMGY培养后 用5ml 的BMMY重悬 之后继续培养。哪种方法正确？
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1楼 2015-04-01 19:29:36
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uranuser

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励应助！ 2015-04-07 11:07:12
这应该是同一种方法吧，你在BMGY中培养结束后离心后收集菌体再加入到BMMY中，这一步就是用少量BMMY重悬后，再增大BMMY体积进行诱导培养吧。
简单说就是都正确。事实上，有文献预计BMGY中的甘油耗尽后不离心，直接加入BMMY进行诱导，我们验证过此种方法表达量没有区别。
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2楼2015-04-02 09:43:22
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wsb0306

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
得看你要表达的东西多少，好不好表达，两个方法一样，只不过诱导时一个浓缩了一个稀释了

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虫子
3楼2015-04-02 14:58:06
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id90

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wsb0306 at 2015-04-02 14:58:06
得看你要表达的东西多少，好不好表达，两个方法一样，只不过诱导时一个浓缩了一个稀释了

这两种方法诱导时，菌浓度不一样。第一种菌浓OD值约为1、第二种菌浓度大于4.我构建的毕赤酵母是甲醇缓慢利用型。表达蛋白不应该在对数生长期吗？
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4楼2015-04-02 15:11:44
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wsb0306

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by id90 at 2015-04-02 15:11:44
这两种方法诱导时，菌浓度不一样。第一种菌浓OD值约为1、第二种菌浓度大于4.我构建的毕赤酵母是甲醇缓慢利用型。表达蛋白不应该在对数生长期吗？...

不一定在指数期诱导，看你的蛋白情况而定

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虫子
5楼2015-04-03 15:47:13
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
能不能问下，你活化的菌是平板上的单菌落还是保存的菌种？然后怎么确定在对数生长期呢？我个人觉得第一种方法好，因为我挑过单克隆直接放BMGY，通常要24h才能到OD值4，时间太长就错过对数期了吧。

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6楼2015-06-07 15:18:41
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么么哒0120

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by uranuser at 2015-04-02 09:43:22
这应该是同一种方法吧，你在BMGY中培养结束后离心后收集菌体再加入到BMMY中，这一步就是用少量BMMY重悬后，再增大BMMY体积进行诱导培养吧。
简单说就是都正确。事实上，有文献预计BMGY中的甘油耗尽后不离心，直接加 ...

你好，摇瓶发酵如何确定甘油已经消耗完？需不需要饥饿处理一段时间再加甲醇？
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7楼2016-09-23 15:35:17
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