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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Apeterson

金虫 (小有名气)

[求助] 凝胶电泳上样问题请教! 已有2人参与

一个是上样孔总是有气泡,网上都说要冲洗,不知道是个怎么样的操作方法。还有一个问题就是,单独上样缓冲液倒是可以沉下去,可是蛋白样品煮沸后就沉不下去了,都飘了出来,是不是因为我的样品蛋白含量太低了?怎么解决这个问题?希望大家给点意见~
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考研奋斗中····
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紫玉寒willie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上样孔有气泡是拔梳子的时候造成的,装好装置加入缓冲液后,用100微升的枪对着孔里吹打就可以把气泡吹走了。我们实验室都是这么做的,很方便。我不知道你蛋白样品煮沸用多长时间,我的是95度1min就好了。如果你是纯化好的蛋白样品还下不去我就不太知道了。我们有直接加loading煮细菌上样的,细菌的菌体会很粘稠无法上样,要去除掉那个粘稠物再上样就能沉下去了。希望对你有用
2楼2015-03-20 12:51:19
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

煮沸后样品沉不下去 是因为样品密度小于running buffer了,可以适当加大loading buffer 的比例,增大样品密度。  
还有一个情况是1楼说的裂解的菌体碎片。 煮样loading buffer要多加一点,不要只按目测的体积1:1加,loadingbuffer加少了样品裂解不彻底,离心时间再长也下不去的。一般是90度10分钟,120000rpm  10min.
3楼2015-04-08 14:49:17
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