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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 凝胶电泳上样问题请教！
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Apeterson

金虫 (小有名气)

[求助] 凝胶电泳上样问题请教！已有2人参与

一个是上样孔总是有气泡，网上都说要冲洗，不知道是个怎么样的操作方法。还有一个问题就是，单独上样缓冲液倒是可以沉下去，可是蛋白样品煮沸后就沉不下去了，都飘了出来，是不是因为我的样品蛋白含量太低了？怎么解决这个问题？希望大家给点意见~
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考研奋斗中····
1楼2015-03-18 15:05:16
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紫玉寒willie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上样孔有气泡是拔梳子的时候造成的，装好装置加入缓冲液后，用100微升的枪对着孔里吹打就可以把气泡吹走了。我们实验室都是这么做的，很方便。我不知道你蛋白样品煮沸用多长时间，我的是95度1min就好了。如果你是纯化好的蛋白样品还下不去我就不太知道了。我们有直接加loading煮细菌上样的，细菌的菌体会很粘稠无法上样，要去除掉那个粘稠物再上样就能沉下去了。希望对你有用
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2楼2015-03-20 12:51:19
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

煮沸后样品沉不下去 是因为样品密度小于running buffer了，可以适当加大loading buffer 的比例，增大样品密度。  
还有一个情况是1楼说的裂解的菌体碎片。 煮样loading buffer要多加一点，不要只按目测的体积1:1加，loadingbuffer加少了样品裂解不彻底，离心时间再长也下不去的。一般是90度10分钟，120000rpm  10min.
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3楼2015-04-08 14:49:17
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