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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 糖，蛋白电泳求助
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zhouxianglzy

新虫 (小有名气)

[求助] 糖，蛋白电泳求助 已有2人参与

荧光电泳：蛋白（4300Da）带负电，多糖（2600Da）带负电，亮色的条带只有糖，暗的条带是糖和蛋白相互作用的。点样时候，糖的质量是相同的，为什么只有糖的条带亮，而相互作用的条带是暗的呢？为什么一个条带窄一个条带宽？为什么跑出来的电泳都是头部尖尖的，不是平的呢？小妹做电泳已经四五个月了，被折磨了好久，求各位大神显神通，指导小妹一把，小妹在这里感激涕零了！

糖，蛋白电泳求助
20150310 电泳结果.png
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1楼 2015-03-10 21:01:33
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匿名

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2楼2015-03-10 23:26:08
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zhouxianglzy

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 立林258369 at 2015-03-10 23:26:08
请问是sds page胶吗？

不是 没有加sds

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2015-03-11 10:51:21
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caokuai1

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你好，我以前也跑过糖的电泳图，不知道你的是多糖吗？多糖跑出来的电泳就是这样的，很难像蛋白一样跑的那么漂亮。还有你跑的是什么胶？
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zhouxianglzy
4楼2015-03-11 15:02:57
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zhouxianglzy

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by caokuai1 at 2015-03-11 15:02:57
你好，我以前也跑过糖的电泳图，不知道你的是多糖吗？多糖跑出来的电泳就是这样的，很难像蛋白一样跑的那么漂亮。还有你跑的是什么胶？

非变性的聚丙烯酰胺。胶的浓度时6%。我想问一下这个胶的浓度到底怎么计算的？
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5楼2015-03-11 20:03:05
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
糖白电泳就是弥散的，6%是胶里面ACR的含量（例：100ml胶里面含0.6g的ACR）。另外你的电泳分析是不是有问题，亮的是糖，暗的应该还是糖，怎么可能是糖和蛋白互做呢。从图上看分子量是一样的，如果是互做分子量变化应该很大的，电泳差异应该很大。
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zhouxianglzy
6楼2015-03-13 09:10:08
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caokuai1

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhouxianglzy at 2015-03-11 20:03:05
非变性的聚丙烯酰胺。胶的浓度时6%。我想问一下这个胶的浓度到底怎么计算的？...

你的是大胶还是小胶，多糖最好用大胶。梯度胶也会更好点。胶的浓度我是参考文献来的，具体的我现在也记不得了，你可以看一下英文文献。
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zhouxianglzy
7楼2015-03-13 10:30:12
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zhouxianglzy

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 帖航 at 2015-03-13 09:10:08
糖白电泳就是弥散的，6%是胶里面ACR的含量（例：100ml胶里面含0.6g的ACR）。另外你的电泳分析是不是有问题，亮的是糖，暗的应该还是糖，怎么可能是糖和蛋白互做呢。从图上看分子量是一样的，如果是互做分子量变化应 ...

对，你说的很对，我现在就是怀疑糖和蛋白没有结合上。但是不知道蛋白去了哪里？
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8楼2015-03-17 12:25:40
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zhouxianglzy

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by caokuai1 at 2015-03-13 10:30:12
你的是大胶还是小胶，多糖最好用大胶。梯度胶也会更好点。胶的浓度我是参考文献来的，具体的我现在也记不得了，你可以看一下英文文献。...

我用的是小胶，我是6%的胶。文献我也看了 现在就是不知道配胶的时候用什么缓冲液溶解？
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9楼2015-03-17 12:27:22
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zhouxianglzy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 帖航 at 2015-03-13 09:10:08
糖白电泳就是弥散的，6%是胶里面ACR的含量（例：100ml胶里面含0.6g的ACR）。另外你的电泳分析是不是有问题，亮的是糖，暗的应该还是糖，怎么可能是糖和蛋白互做呢。从图上看分子量是一样的，如果是互做分子量变化应 ...

还有应该加浓缩胶吧？
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10楼2015-03-17 12:28:38
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