应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 求助！急包涵体纯化！
51/1返回列表
查看: 1928  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

cs99900810

银虫 (小有名气)

[求助] 求助！急包涵体纯化！ 已有3人参与

本人现在在做一个包涵体纯化，NI柱纯化，用尿素溶解蛋白，现在主要存在两个问题
1 目的蛋白与镍柱结合效率不高
2纯化后仍有杂带
因为是新手想问问大家是否有其他的方法能除去杂蛋白，能否用咪唑进行纯化，希望方法不要复杂，因为我现在没有分子筛纯化的试剂与仪器，也没有离子交换的有关东西
我不希望是复制粘贴的东西，如果真的能帮到我 我会追加金币。另外我手上只有3kD的超滤管
图片最后一个泳道是我的纯化后蛋白，最上面的条带为我的目的蛋白，约45KD左右
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-03-10 17:28:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxgnh166

银虫 (正式写手)
★
cs99900810(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-12 20:24:16
纯化包涵体有两种1.变性条件下纯化，如果你的表达没有问题，NI柱的吸附应该是没有什么问题的。2.复性条件下纯化，如果你的复性结果不好，HIS标签被包裹，NI柱是不吸附的。单一一个NI柱效果不好，你可以尝试下离子交换。
赞一下 回复此楼
8楼2015-03-12 09:11:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

九字江山

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cs99900810(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-03-10 22:36:57
cs99900810: 金币+2 2015-03-11 08:51:46
1. 挂不上柱就延长一下挂柱时间。
2. 这张图上哪个是你的目的蛋白条带啊？是不是最后一张图的第二条？好歹P个箭头啊。。。你这个蛋白应该是降解的问题，试试把His放到C端试试。
3. 纯化包涵体时，用不同浓度的尿素洗一下。
赞一下 回复此楼
2楼2015-03-10 17:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cs99900810

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 九字江山 at 2015-03-10 17:39:08
1. 挂不上柱就延长一下挂柱时间。
2. 这张图上哪个是你的目的蛋白条带啊？是不是最后一张图的第二条？好歹P个箭头啊。。。你这个蛋白应该是降解的问题，试试把His放到C端试试。
3. 纯化包涵体时，用不同浓度的尿素 ...

1我延长时间了
2最后泳道从上数第一条是目的带，我的HIS在C端
3已用不同浓度尿素洗过
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-10 17:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cs99900810 at 2015-03-10 17:44:41
1我延长时间了
2最后泳道从上数第一条是目的带，我的HIS在C端
3已用不同浓度尿素洗过...

全是降解带。。。可能在破菌时就降解了。。。━┳━　━┳━ 做下Western检测下，其实这蛋白挂的还可以。
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-10 17:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 BnSlaJi8z5Vo 2026-08-17 3/150 2026-08-17 17:38 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 8/400 2026-08-17 17:26 by angus9576
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 5/250 2026-08-17 16:38 by CBFiACZS7HAK
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 3/150 2026-08-17 16:35 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +34 医学老男孩 2026-08-13 81/4050 2026-08-17 16:20 by yudaoqian88
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6GojgJvkDudM 2026-08-16 7/350 2026-08-17 16:14 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭