24小时热门版块排行榜    

查看: 1896  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

cs99900810

银虫 (小有名气)

[求助] 求助!急包涵体纯化! 已有3人参与

本人现在在做一个包涵体纯化,NI柱纯化,用尿素溶解蛋白,现在主要存在两个问题
1 目的蛋白与镍柱结合效率不高
2纯化后仍有杂带
因为是新手想问问大家是否有其他的方法能除去杂蛋白,能否用咪唑进行纯化,希望方法不要复杂,因为我现在没有分子筛纯化的试剂与仪器,也没有离子交换的有关东西
我不希望是复制粘贴的东西,如果真的能帮到我 我会追加金币。另外我手上只有3kD的超滤管
图片最后一个泳道是我的纯化后蛋白,最上面的条带为我的目的蛋白,约45KD左右
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxgnh166

银虫 (正式写手)


cs99900810(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-12 20:24:16
纯化包涵体有两种1.变性条件下纯化,如果你的表达没有问题,NI柱的吸附应该是没有什么问题的。2.复性条件下纯化,如果你的复性结果不好,HIS标签被包裹,NI柱是不吸附的。单一一个NI柱效果不好,你可以尝试下离子交换。
8楼2015-03-12 09:11:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

九字江山

银虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cs99900810(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-03-10 22:36:57
cs99900810: 金币+2 2015-03-11 08:51:46
1. 挂不上柱就延长一下挂柱时间。
2. 这张图上哪个是你的目的蛋白条带啊?是不是最后一张图的第二条?好歹P个箭头啊。。。你这个蛋白应该是降解的问题,试试把His放到C端试试。
3. 纯化包涵体时,用不同浓度的尿素洗一下。
2楼2015-03-10 17:39:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cs99900810

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 九字江山 at 2015-03-10 17:39:08
1. 挂不上柱就延长一下挂柱时间。
2. 这张图上哪个是你的目的蛋白条带啊?是不是最后一张图的第二条?好歹P个箭头啊。。。你这个蛋白应该是降解的问题,试试把His放到C端试试。
3. 纯化包涵体时,用不同浓度的尿素 ...

1我延长时间了
2最后泳道从上数第一条是目的带,我的HIS在C端
3已用不同浓度尿素洗过
3楼2015-03-10 17:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

九字江山

银虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by cs99900810 at 2015-03-10 17:44:41
1我延长时间了
2最后泳道从上数第一条是目的带,我的HIS在C端
3已用不同浓度尿素洗过...

全是降解带。。。可能在破菌时就降解了。。。━┳━ ━┳━ 做下Western检测下,其实这蛋白挂的还可以。
4楼2015-03-10 17:49:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +17 Lanmanbaby 2026-08-09 29/1450 2026-08-12 00:24 by zhanghaozhu
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见