24小时热门版块排行榜    

查看: 4391  |  回复: 4

fanwq258

木虫 (正式写手)

[求助] PCR用cDNA能够扩增出条带,基因组DNA却扩增不出来 已有4人参与

PCR用cDNA能够扩增出条带,基因组DNA却扩增不出来,为什么呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

要么好好活,要么死,拒绝半死不活
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
因为基因组DNA模板比cDNA要复杂的多啊,如果采用和cDNA同样的扩增方式肯定扩增不出来啊。
比如,首先模板浓度的问题,cDNA 10ng,基因组DNA 0.1-1ug。
其次,酶,对于cDNA可能普通的Taq酶能扩增出来,但是基因组就很难说了,一般无高要求的话,普通的热启动聚合酶即能扩增出来
同时,引物设计也应更准确,还要考虑到你的模板的长度,如果大于15kb的话,扩增就使用长片段高保真聚合酶
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-03-05 17:16:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqc87

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
若要保证用cDNA和DNA为模板都能扩出来的话,上下游引物一定都要设计在外显子,检查下你按cDNA序列设计的引物是不是在DNA里跨内含子,被内含子隔断了
3楼2015-03-07 05:49:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongmianhua

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

基因组和cDNA的条带大小不一定一样,扩增条件因此也不可能完全一样;当然还有很多其他原因
体会生活
4楼2015-04-15 15:17:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshine092

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果是真核生物考虑楼上说的内含子和外显子的问题,另外有可能cDNA和基因组里模板浓度不一样,用基因组的时候尝试增加循环数。
5楼2015-04-15 17:10:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanwq258 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见