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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3'RACE测序结果求助
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abczhuazhua

铜虫 (初入文坛)

[交流] 3'RACE测序结果求助 已有4人参与

本人现在做3race，测序结果存在一种现象，不知各位大侠遇到过没？在此求揭示！本人按照clontech的试剂盒做的结果，pcr，切胶回收，连接后转化，挑单克隆跑pcr，检查到目的条带后每个基因送测10个菌。测序结果都是我要的基因，但是相同基因不同菌落的序列之间存在差异，即在靠近polyA处，序列长短不一，也就是说3’UTR序列长短不一，但是前提条件是短的序列测序结果也含有polyA。请问这是什么现象？如何选择序列？
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1楼 2015-02-03 14:53:14
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hihe99

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到过，感觉有可能是APA，但是也有可能是反转录的时候的错配，因为反转的时候的温度只有42度嘛，不知道怎么验证，先搁着。
mark下，到时候再来看别人怎么说的，或者楼主你怎么解决的。
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4楼2015-02-07 16:52:10
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