| 查看: 12748 | 回复: 10 | |||
空谈误国金虫 (正式写手)
潜龙勿用
|
[求助]
qRT-PCR模板量应该加多少？ 已有4人参与
|
||
|
我模板cDNA不稀释加 2ul，目的基因CT值35,36,37（平行性一点不好）.。。。.β-actin的ct值是18（三个复孔相差0.3以内）. 内参挺好说明不是操作的问题，我在想是不是目的基因表达量低，我应该提高模板量至4ul? 但是，我突然想到是不是我模板量加多了导致目的基因CT值不稳定？请问模板量过高会产生这样的不利影响吗？ 还是说我应该把模板量提高到4ul，6ul试试？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有94人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教关于qRT-PCR对照设置的一些问题
已经有7人回复
- qrt-pcr加cDNA的量，怎么加？
已经有12人回复
- 判断引物是否适合用于qRT-PCR
已经有4人回复
- PCR时不加模板的对照中跑出了与目的片段大小相近的条带怎么回事？
已经有11人回复
- QPCR模板浓度一定要是200ng或以下吗
已经有4人回复
- 请问qRT-PCR的标准曲线中扩增效率过高是怎么回事
已经有8人回复
- 基因组DNA模板质量对PCR有什么影响
已经有13人回复
- 实时定量PCR的模板是mRNA还是cDNA好？
已经有6人回复
- RT-PCR, q-PCR, 和qRT-PCR的引物可以相同吗？
已经有3人回复
- 实时荧光定量pcr，cDNA的加入量会影响结果的准确度吗？
已经有24人回复
- 关于QRT-PCR样本处理
已经有4人回复
- 求助：相对定量qRT-PCR，需要定量mRNA或者cDNA吗？
已经有4人回复
- 求高手推荐qRT-PCR数据分析和作图的R的包
已经有6人回复
- 关于qRT-PCR内参基因的验证
已经有10人回复
- qRTPCR内参基因是不是每次都要做
已经有10人回复
- 有关RT-PCR模板RNA量的问题，请高手解答！！！
已经有16人回复
- 求解释这pcr是啥问题，帮同学问的^_^
已经有29人回复
- RT-PCR逆转录加模板问题
已经有9人回复
- 荧光定量PCR的模板浓度
已经有12人回复
- 求助：约6kb质粒做模板的pcr程序怎么设定啊
已经有12人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR
已经有16人回复
- 【求助/交流】qRT-PCR需要做不加RT的对照吗？
已经有3人回复
- 【求助/交流】pcr中模板量的问题
已经有11人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
空谈误国(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:04:38
感谢参与，应助指数 +1
空谈误国(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:04:38
|
一，ct超过32以上就一般不能使用了，问题可能为目的基因表达太低，你可以用普通pcr检测以下你的摸板，是否有基因表达并且引物是否有dimer。确定过后才可上机。 二，内参的选择，你选择的内参在你的实验里显然已经不太适用了，需要重新选择内参，具体你需要查阅文献了，并不是一个内参用到底，不同的实验有不同的要求，你需要一个表达量低的内参 基因，并且控制你的内参和你的目的基因的ct值在10以内（也就是说一个内参高过20，目的低过30。） 这样数值才可靠。 三，最好不要更改体系，变换摸班浓度以稀释为主，不要增添。 |
4楼2015-01-28 19:04:33
2楼2015-01-28 16:32:59
空谈误国
金虫 (正式写手)
潜龙勿用
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 833
- 散金: 115
- 帖子: 427
- 在线: 70.9小时
- 虫号: 2558636
- 注册: 2013-07-22
- 性别: GG
- 专业: 免疫识别/免疫耐受/免疫调
3楼2015-01-28 18:17:10
飞约疯人院
专家顾问 (著名写手)
科学怪人
-
专家经验: +140 - MolEPI: 2
- 应助: 308 (大学生)
- 金币: 1099.5
- 散金: 8294
- 红花: 65
- 沙发: 5
- 帖子: 1996
- 在线: 266.1小时
- 虫号: 3188421
- 注册: 2014-05-07
- 专业: 生物化学
- 管辖: 分子生物
5楼2015-01-28 21:58:53
空谈误国
金虫 (正式写手)
潜龙勿用
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 833
- 散金: 115
- 帖子: 427
- 在线: 70.9小时
- 虫号: 2558636
- 注册: 2013-07-22
- 性别: GG
- 专业: 免疫识别/免疫耐受/免疫调
6楼2015-05-02 14:15:16
|
考虑引物问题，内参跑18说明引物浓度够了，目的跑35+不知道你一共多少个循环，跑到35+很可能目的基因没有扩增，建议用相同的protocol跑一个普通PCR看看有没有条带。如果引物没有问题那很肯能就是该基因不表达。 发自小木虫Android客户端 |
7楼2016-02-14 18:10:29
8楼2016-02-14 18:11:17
fudan671
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2149.1
- 散金: 335
- 红花: 7
- 帖子: 1343
- 在线: 45小时
- 虫号: 4075866
- 注册: 2015-09-16
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
9楼2016-02-14 19:37:06
10楼2016-03-31 07:10:30
40