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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助!!帮忙分析一下荧光定量的溶解曲线!! 已有1人参与

第一张是标准曲线和高表达量样品的溶解曲
第二张是低表达量样品的溶解曲线

也就是说二者的差别只在于模板量的多与少,可是这溶解曲线上的“鼓包”着实让人看着不爽啊~~大家帮忙分析一下,看是怎么解决!拜托!拜托!!

求助!!帮忙分析一下荧光定量的溶解曲线!!
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求助!!帮忙分析一下荧光定量的溶解曲线!!-1
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by logowang at 2015-01-27 21:49:20
结合你的扩增曲线看一看,感觉上是你的低浓度模板浓度过低,没有得到特异扩增所需要的荧光强度,这样的话,溶解曲线多半都是引物二聚体峰,没什么参考价值。

如果你能得到良好的ct值(32以内),那么这样的溶解曲 ...

这是扩增曲线,第一张是标准曲线样品和高浓度待测样品的扩增曲线,第二张是低浓度待测样品的扩增曲线,ct值在30以内。。。不理解,引物二聚体在溶解曲线上的位置一般应该在哪?
求助!!帮忙分析一下荧光定量的溶解曲线!!-2
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求助!!帮忙分析一下荧光定量的溶解曲线!!-3
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
4楼2015-01-28 11:56:29
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

看见您之前回过的一个帖子,可以帮忙分析一下吗?@飞约疯人院
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
2楼2015-01-27 15:18:38
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaohaixie(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:11:30
结合你的扩增曲线看一看,感觉上是你的低浓度模板浓度过低,没有得到特异扩增所需要的荧光强度,这样的话,溶解曲线多半都是引物二聚体峰,没什么参考价值。

如果你能得到良好的ct值(32以内),那么这样的溶解曲线没有办法去解释,你尝试更换体系(比如仪器或者板子),看看是否还有这样的杂峰。
3楼2015-01-27 21:49:20
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logowang

铜虫 (小有名气)

★ ★
xiaohaixie(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:11:43
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaohaixie at 2015-01-28 11:56:29
这是扩增曲线,第一张是标准曲线样品和高浓度待测样品的扩增曲线,第二张是低浓度待测样品的扩增曲线,ct值在30以内。。。不理解,引物二聚体在溶解曲线上的位置一般应该在哪?

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...

你的待测样品ct已经到32左右了。属于比较高的值了。不是很理想,这样的话,加上你的溶解曲线,真的会去怀疑你的低浓度扩增是否非特异。 因为以你的描述,引物使用是一致的,并且模板内容也是一样的,这样的话,高浓度下看起来引物并无太大问题,所以如果你是在做绝对定量,稀释的倍数不要太大,高浓度23cycle,低浓度32cycle这样差异太大了。调整低浓度在26cycle这样就能避免一些奇怪的事情

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2015-01-28 18:49:34
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