| 查看: 3537 | 回复: 28 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
请教一个western blot的问题，急需答案，谢谢！！！！ 已有20人参与
|
||
|
在做一个大小为32kDa的蛋白，是abcam的，按照计算的正常上样量，结果如图（已做完内参，没有问题）。怀疑是目的蛋白的表达量不够，增加上样量的结果如图。 实验的大致过程如下 1，电泳 60V(30min),80V（30min）,100V跑到底 2 转膜 半干转，15V（30min）,硝酸纤维素膜 3 封闭 37℃2h,3h,4℃过夜都试过,未发现太大影响（都做不出结果）。 4 一抗 4℃过夜或者37℃2h（根据封闭的时间选择），稀释度是按照说明书上的要求1：1000 5 洗膜 TBST 10min/次×6 6 二抗 37℃1h，稀释度1:5000 7 洗膜 同上 8 显影 ECL暗室处理3min（说明书要求，没问题），照相时的时间选择是5s,200s,50张。 抗体是用PBS稀释（实验室一直都是这么做的），试过用3%BSA稀释，无变化。 小弟已经实在想不出为什么了（快疯），请各位师兄师姐发发慈悲给小弟直条明路吧。  正常上样量  上样量加倍  最大上样量 |
回复此楼» 猜你喜欢
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有8人回复
-
国际合作可查了，中了面上
已经有17人回复
-
怎么查啊
已经有3人回复
-
国合可查了
已经有3人回复
-
系统进不去
已经有4人回复
-
系统查不到
已经有3人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有3人回复
-
国合里面能看到了
已经有6人回复
-
今天务委会开完了，明天出结果吗
已经有23人回复
-
科研孤儿太难了
已经有20人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教为什Western Blot一定要用两种抗体？
已经有8人回复
- 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办
已经有21人回复
- western blot出现多条带是什么原因
已经有8人回复
- western-blot的问题！！！
已经有5人回复
- 请大家帮我看一下我的western blot的图
已经有12人回复
- Western Blot 目标条带跑不出来，内参条带清晰
已经有13人回复
- 请教Western blot问题
已经有9人回复
- western blot中古怪的非特异性条带
已经有9人回复
- western blot 的蛋白上样量
已经有8人回复
- 真情求助：买的用于Western blot 的一抗能不能用来做免疫荧光或者免疫组化
已经有6人回复
- 讨论一下western blot的毒性问题
已经有8人回复
- western blot 显色6组里边只有一组有条带，急，求助！谢谢！
已经有4人回复
- western-blot 技术
已经有12人回复
- Western Blot出现问题
已经有19人回复
- 有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！
已经有22人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- Western Blot实验的蛋白条带都连在一起
已经有37人回复
- western blot时marker问题求助
已经有18人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀
已经有10人回复
- 【求助/交流】western blot 一直都跑不出来，不知道原因，大侠给分析一下啊！？
已经有13人回复
- 【求助/交流】western blot 的一抗二抗由来？
已经有4人回复
- 原创首发：Tips for Western Blot-一些小技巧而已
已经有13人回复
4楼2015-01-26 14:20:11
qq705369449
银虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 屏蔽内容, 无应助，字符乱码 2015-01-26 20:10:02
西门吹雪170: 应助指数-1, 屏蔽内容, 无应助，字符乱码 2015-01-26 20:10:02
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-01-26 10:43:20
3楼2015-01-26 12:08:14
5楼2015-01-26 14:48:21
28