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1楼2015-01-22 14:49:32

ptttmt

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【答案】应助回帖

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zhjzhou: 金币+2, ★有帮助, 谢谢！ 2015-01-22 15:50:21

His标签在哪一端？N端？C端？中间？是否容易暴露及延伸出来？可以对融合蛋白进行模建，看看his标签的展示情况。你还可以试一下在破碎液中加入终浓度2M尿素，再挂柱纯化试试；若2M还是纯化不到，加入终浓度8M尿素再纯化试试。

2楼2015-01-22 15:35:03

zhjzhou

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-22 15:35:03
His标签在哪一端？N端？C端？中间？是否容易暴露及延伸出来？可以对融合蛋白进行模建，看看his标签的展示情况。你还可以试一下在破碎液中加入终浓度2M尿素，再挂柱纯化试试；若2M还是纯化不到，加入终浓度8M尿素再纯 ...

用的是pet28a载体，His-tag在前面，我这个是可溶性蛋白，要加尿素吗？

3楼2015-01-22 15:50:01

ptttmt

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3楼: Originally posted by zhjzhou at 2015-01-22 15:50:01
用的是pet28a载体，His-tag在前面，我这个是可溶性蛋白，要加尿素吗？...

把你的纯化溶液和步骤发上来看看，关键是washing buffer里面咪唑的浓度，看你这图片，一点都没有挂上的感觉，这不应该啊，多多少少应该有点才对

4楼2015-01-22 17:39:53

loveqiuqiu

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【答案】应助回帖

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使用washing buffer 和不同浓度的咪唑溶液依次洗脱，最后的strip 也要留下，左右洗脱液都跑一下，如果都没有的话那是根本没有洗脱下来吧
我每次用的依次为 washing buffer开始1ml、washing buffer结束前1ml，咪唑浓度200 3ml、 400 2ml 、600 2ml、800、 1000、strip buffer各1ml 每1ml接1个EP中，各样品都跑一下基本都是会出现条带的
希望能帮助到你

5楼2015-01-23 00:27:52