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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母质粒转入大肠杆菌后PCR无法检测到
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faile18

金虫 (小有名气)

[求助] 酵母质粒转入大肠杆菌后PCR无法检测到 已有1人参与

如题，酵母双杂交筛选到阳性克隆后，提取质粒转化商品化的大肠杆菌感受态，可以在抗性培养基上正常生长，但菌液PCR无法检测，长出的克隆在液体培养基中也无法扩繁。请教原因是什么，该如何解决。感激！
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1楼 2015-01-20 09:20:15
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titus0805

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-21 21:22:24
确定质粒有没有原核的ori位点，没有的话就不能转大肠杆菌
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2楼2015-01-20 09:57:47
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kingjazz23

金虫 (小有名气)
楼主 你好 我想问问你是用什么方法提取酵母的质粒的 我最近在做这个实验 一直没做出来

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3楼2017-07-24 18:46:02
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faile18

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kingjazz23 at 2017-07-24 18:46:02
楼主 你好 我想问问你是用什么方法提取酵母的质粒的 我最近在做这个实验 一直没做出来

我们用的是公司的试剂盒提的，酵母高纯度质粒小量快速提取试剂盒
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4楼2017-07-24 19:14:58
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狗屎运

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by faile18 at 2017-07-24 19:14:58
我们用的是公司的试剂盒提的，酵母高纯度质粒小量快速提取试剂盒...

你好，我想问一下，你们提取的质粒浓度大不大啊，为什么我用天根的试剂盒提出来的酵母质粒浓度都特别小，基本都是10ng/μL一下。

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5楼2017-09-06 09:31:13
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