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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于融合PCR
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兰舍难分

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于融合PCR 已有4人参与

我现在正在做，也设计了两对引物，中间的重复的碱基有700多bp，请问这样能做成功吗？对结果有影响吗？
望做过的大神指点一下
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1楼 2015-01-19 13:23:22
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兰舍难分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-20 08:51:34
3000bp不算长啊 ,扩增不出来？我想可能是酶的原因，普通的Taq酶可能扩增不了，换成热启动Taq酶，3000bp的也见不着用长片段酶扩增，大于10kb的采用长片段酶扩增，小于10kb的热启动Taq酶足够扩增出来http://www.detai ...

我第一次用普通酶克出来过一次，可是到后面在用同样条件扩增时却怎么都克不出来了！很是郁闷。。。热启动Taq酶？我用的一般是rTaq酶和EXrTaq酶。。。
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7楼2015-01-25 22:26:58
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titus0805

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是重叠pcr吗？重复的碱基有700多？为什么？
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2楼2015-01-19 13:32:45
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兰舍难分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by titus0805 at 2015-01-19 13:32:45
是重叠pcr吗？重复的碱基有700多？为什么？

我原本克隆的基因是3000多bp，之前用一对引物总是克不出来（可能有些长了的原因），现在准备用重叠互补融合PCR方法来克隆，将这个目的基因从中间分成两段来克隆，我设计的两对引物就是这样的，第一对下游跟第二对的上游之间的重叠部分有700bp，想问一下这样会不会做不出来，或是有影响啊？
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3楼2015-01-19 13:56:49
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-26 10:01:54
3000bp不算长啊 ,扩增不出来？我想可能是酶的原因，普通的Taq酶可能扩增不了，换成热启动Taq酶，3000bp的也见不着用长片段酶扩增，大于10kb的采用长片段酶扩增，小于10kb的热启动Taq酶足够扩增出来http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-01-20 08:51:34
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