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关于融合PCR 已有4人参与
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我现在正在做，也设计了两对引物，中间的重复的碱基有700多bp，请问这样能做成功吗？对结果有影响吗？ 望做过的大神指点一下 |
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2楼2015-01-19 13:32:45
3楼2015-01-19 13:56:49
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-26 10:01:54
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| 3000bp不算长啊 ,扩增不出来？我想可能是酶的原因，普通的Taq酶可能扩增不了，换成热启动Taq酶，3000bp的也见不着用长片段酶扩增，大于10kb的采用长片段酶扩增，小于10kb的热启动Taq酶足够扩增出来http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html |
4楼2015-01-20 08:51:34
zhaozhibozhi
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热启动Taq酶，就是温度达到95摄氏度了，酶活才能启动，PCR才能扩增，这就避免了在预变性或者在我们配置反应体系的时候酶就发挥活性，导致引物二聚体或者其他非特异性条带产生。 TAKAR 的rTaq酶就是普通的Taq酶啊，EXrTaq酶就是稍具保真性的普通Taq酶（可以说是一般的保真酶吧，呵呵）。rTaq扩增不出来很正常的，相反的如果不是对扩增要求十分精确如突变检测等（涉及到一个碱基的），不建议使用保真性的酶，它具有保真性可以切掉你错配的碱基同样也可能会将你的模板（引物）降解掉，导致什么都扩增不出来。所以，一般PCR热启动酶足够了，不会产生二聚体也不会降解模板或是引物。http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html第一段有原理， |
8楼2015-01-26 10:50:42
