24小时热门版块排行榜    

查看: 2480  |  回复: 14

searush

铜虫 (初入文坛)

[求助] 有关western blot 的问题 已有2人参与

请问下  我做的是NF-KB p65的抗体  显影结果怎么会在目的带中出现两条带呢?求解

有关western blot  的问题
IMG_20150112_170521.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

学术研究
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

searush

铜虫 (初入文坛)

自己顶一个  希望 大虫们指教
学术研究
2楼2015-01-12 17:09:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

molizerd

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
searush(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:04:55
这是压片曝光的还是显色的还是机器曝光的?
如果是压片的话是因为你压的胶片动了。其他的你这个是单抗还是多抗?

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-01-12 17:33:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
searush(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:05:07
除了楼上说的原因之外,还有就是你在进行PAGE的时候,是一次上样还是两次上样呢,如果是两次上样的话,也会产生这种结果的。整个实验是没什么问题的。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-01-12 17:37:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

searush

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-12 17:33:29
这是压片曝光的还是显色的还是机器曝光的?
如果是压片的话是因为你压的胶片动了。其他的你这个是单抗还是多抗?

机器曝光的
学术研究
5楼2015-01-13 18:21:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

searush

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-12 17:37:32
除了楼上说的原因之外,还有就是你在进行PAGE的时候,是一次上样还是两次上样呢,如果是两次上样的话,也会产生这种结果的。整个实验是没什么问题的。

我就上样一次而已
学术研究
6楼2015-01-13 18:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

searush

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by molizerd at 2015-01-12 17:33:29
这是压片曝光的还是显色的还是机器曝光的?
如果是压片的话是因为你压的胶片动了。其他的你这个是单抗还是多抗?

单抗  CST的抗体
学术研究
7楼2015-01-13 18:22:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

molizerd

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by searush at 2015-01-13 18:22:29
单抗  CST的抗体...

今天我师弟也曝成这样了。。他上样是纯化的原核表达蛋白。。抗体是他自己制备的单抗。。老师说可能是蛋白降解了。。或者你的蛋白样品是不是自己就能形成聚合体,然后成了不同大小的条带。

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2015-01-13 23:58:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
searush(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-14 20:05:22
引用回帖:
6楼: Originally posted by searush at 2015-01-13 18:21:50
我就上样一次而已...

据我做WB的经验,你这个结果还是没什么本质问题的。我认为可能还是实验过程中操作误差带来的(例如:转膜的时候膜不小心动了一下)。仔细观察两条带的话,不难发现,上下的两条带虽然不在同一个位置,但是应该是一个蛋白的。
机器曝光,采用单抗(GST的抗体或是HIS抗体),这些都是再正常不过了,况且western这个实验本身是没有太大技术含量的,呵呵,只要做的过程中操作上不出现大披露,试剂使用正确,样品确保正常,就应该会成功。
希望对你有所帮助。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
9楼2015-01-14 09:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by searush at 2015-01-13 18:21:50
我就上样一次而已...

还有一个很好办的方法,你观察你的marker,如果marker也是和蛋白的条带一样,都出现双条带的话,就说明了不是样品的问题,而是操作过程中出现的误差。
如果marker是正常的,只有蛋白出现了双条带,那就是样品的问题了。

所以你先确定marker是否正常,谢谢
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
10楼2015-01-14 09:34:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 searush 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 石河子大学(211、双一流)硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 305分求调剂(食品工程) +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 考研调剂 +4 来好运来来来 2026-03-21 4/200 2026-03-22 12:15 by 星空星月
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
信息提示
请填处理意见